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I. préparation avant détection

Environnement et préparation des équipements

Opération sur le terrain sélectionnez un endroit frais et sans vent, la température est contrôlée à 15 - 35 ℃; Les opérations de laboratoire nécessitent le nettoyage de la table pour éviter la contamination par les acides nucléiques.

Retirez le détecteur et allumez - le et Préchauffez - le pendant 10 minutes tout en vérifiant la quantité d'énergie (durée de vie ≥ 2 heures) ou l'alimentation stabilisée externe.

Consommables et préparation des réactifs

Consommables de vérification: cartes de réactifs d'amplification préfabriquées, lysats d'échantillons, tubes abrasifs jetables, pipettes, têtes d'aspiration de cartouche, tubes de centrifugation sans enzymes.

Réchauffage du réactif: Laissez la carte de réactif préfabriquée réfrigérée à température normale pendant 10 minutes pour éviter que la différence de température ne provoque l'échec du réactif; Confirmez que le lysat n'est pas trouble, pas de précipitation.

Préparation des contrôles: un contrôle négatif (échantillon sain de pin) et un contrôle positif (échantillon d'ADN standard de nématode du pin) doivent être définis pour chaque lot.

II. Traitement avant échantillon (5 - 10 minutes)

Échantillonnage: À partir de la jonction de la maladie du bois soupçonné d'être malade, coupez 1 à 2 g de copeaux de bois ou de segments de bois et placez - les dans un tube abrasif jetable.

Lyse libère des acides nucléiques

Ajouter 500 μl de lysat dans le tube de broyage, secouer vigoureusement pendant 1 minute après avoir serré le couvercle ou traiter avec le module à ultrasons compagnon du détecteur pendant 30 secondes.

Chauffage du bain d'eau: bain d'eau bouillante pendant 5 minutes (bouilleur d'eau portable disponible sur le terrain), laisser refroidir à la température ambiante après le retrait.

Préparation du surnageant: centrifuger à 10 000 tr / min pendant 1 minute (sans centrifugeuse, on peut laisser reposer 2 minutes pour prélever le surnageant) et aspirer 100 µl de surnageant dans un nouveau tube de centrifugation sans Enzyme pour servir de liquide d'échantillon à tester.

Iii. Essai d'échantillonnage et de montée (10 - 15 minutes)

Opération d'addition

Déchirez la membrane préfabriquée de fermeture de carte de réactif, aspirez 20 μl de liquide d'échantillon à tester avec une pipette, ajoutez lentement dans le trou de réaction de carte de réactif pour éviter la création de bulles d'air.

Dans la carte de réactif du contrôle négatif, du contrôle positif, on ajoute simultanément 20 µl de liquide échantillon négatif, respectivement de liquide étalon positif.

Appuyez légèrement sur la paroi latérale de la carte de réactif pour vous assurer que le liquide est bien mélangé avec le réactif lyophilisé, le couvercle est scellé pour empêcher la contamination.

Paramètres de montée

Placez la carte de réactif dans la fente de carte de détecteur, fermez la porte de la cabine et sélectionnez le programme de détection de nématode du pin dans l'interface à écran tactile.

Paramètres de réglage: température d'amplification isotherme (méthode lamp 63°c, méthode RPA 39°C), temps de réaction 20 minutes, cliquez sur "start Detection".

Interprétation des résultats et gestion des données (5 minutes)

Résultats voir

Après la fin de la réaction, le détecteur génère automatiquement le résultat de la détection: la méthode du canal Fluorescent est positive avec l'apparition d'une croissance exponentielle marquée de la courbe; La méthode de la bande de test de chromatographie est positive avec la ligne de détection (ligne T) et la double bande de la ligne de contrôle de la qualité (ligne c), seule la ligne c est négative et aucune bande n'est invalide.

Critères de lecture: le contrôle positif doit être positif, le contrôle négatif doit être négatif, sinon le résultat de ce test est invalide.

Conservation et téléchargement des données

Cliquez sur « enregistrer les données » pour enregistrer des informations telles que le numéro d’échantillon, le temps de détection, le lieu d’échantillonnage, etc.; Prise en charge du téléchargement Bluetooth / 4G sur la plate - forme de quarantaine forestière.

Exportez le rapport de détection, Archivez le dépôt après l'impression.

V. nettoyage ultérieur et précautions

Retirez la carte de réactif, Emballez - la dans un sac scellé conformément aux exigences de biosécurité, ramenez - la au laboratoire pour un traitement centralisé et interdisez - la de jeter dans la nature.

Essuyez la fente de carte de détecteur avec de l'alcool à 75% et la surface, éteignez l'alimentation; Pipettes, tubes de broyage et autres consommables selon le traitement des déchets médicaux.

La détection d'échantillons anormaux nécessite des tests répétés et les échantillons encore positifs doivent être envoyés au laboratoire pour confirmation par PCR quantitative par fluorescence.