Étapes de fonctionnement du kit de détection ELISA de l'antigène cœurs p27 pour chats

1. Dilution et dosage des étalons: dans le paquet d'étalonnage enzymatique est placé sur la plaque 10 puits de l'étalon, ajouter 100 μl de l'étalon dans di I, deuxième puits, puis 50 μl de dilution de l'étalon dans di I, deuxième puits, mélanger; Puis prendre 100 µl de di un puits, chacun de di un deuxième puits, ajouter respectivement dans le troisième et le quatrième puits, puis ajouter 50 µl de dilution de l'étalon dans le troisième et le quatrième puits, respectivement, mélanger; Ensuite, dans le troisième et le quatrième puits, on prélève d'abord 50 µl chacun, puis on prélève 50 µl chacun, puis on ajoute 50 µl chacun dans le septième et le huitième puits, puis on ajoute 50 µl de dilution de produit standard dans le septième et le huitième puits, puis on ajoute 50 µl de dilution de produit standard dans le cinquième et le sixième puits à partir du septième et du huitième puits, puis on ajoute 50 µl de dilution de produit standard dans le cinquième et le sixième puits, puis on mélange; Après malaxage, 50 µl de chacun des cinquième et sixième puits sont ajoutés aux neuvième et dixième puits, puis 50 µl de dilution de produit standard sont ajoutés au neuvième et dixième puits, respectivement, et 50 µl sont retirés du neuvième et dixième puits après malaxage. (chaque puits a été dosé à 50 µl après dilution à des concentrations respectives de 180 ng / L, 120 ng / L, 60 ng / L, 30 ng / L, 15 ng / l).

2.sample: Placez des trous vides séparément (les trous de contrôle vides n'ajoutent pas l'échantillon et le réactif de référence enzymatique, les étapes restantes fonctionnent de la même manière), les trous d'échantillon à tester. Dans le puits de l'échantillon à tester sur la plaque où l'enzyme est encapsulée, ajouter d'abord 40 µl de dilution de l'échantillon, puis 10 µl de l'échantillon à tester (la dilution finale de l'échantillon est multipliée par 5). Ajouter l'échantillon au fond du trou de la plaque de marquage enzymatique, essayez de ne pas toucher la paroi du trou, agitez doucement et mélangez.

3. Incubation: incuber à 37 ℃ pendant 30 minutes après avoir scellé la plaque avec un film de plaque.

4. Liquide de dosage: 30 (20 fois 48T) fois concentré liquide de lavage est dilué avec de l'eau distillée 30 (20 fois 48T) fois.

5. Lavage: Retirez soigneusement le film de la plaque d'étanchéité, jetez le liquide, égouttez, remplissez chaque trou avec le liquide de lavage, laissez reposer 30 secondes après l'égouttage, répétez ainsi 5 fois, battez le sec.

6. Ajouter l'enzyme: ajouter 50 μl de réactif d'étalon d'enzyme par puits, à l'exception des puits vides.

7. Incubation: même opération 3.

8. Lavage: même opération 5.

9. Rendu des couleurs: chaque trou d'abord ajouter l'agent de rendu des couleurs A50 μl, puis l'agent de rendu des couleurs B50 μl, mélanger légèrement sous agitation, 37 ℃ éviter le rendu de la lumière pendant 15 minutes.

10. Terminaison: ajouter 50 μl de liquide de terminaison par puits pour mettre fin à la réaction (à ce stade, le bleu tourne vers le jaune).

11. Détermination: l'Absorbance (valeur OD) de chaque trou est mesurée dans l'ordre séquentiel avec un climatiseur vide zéro, longueur d'onde de 450 nm. Le dosage doit être effectué 15 minutes après l'addition du liquide de terminaison.