Gamme de détection:

30ng/L à 800ng/L

But de l'utilisation:

Ce kit est utilisé pour déterminer la teneur en facteur de croissance épidermique (EGF) des échantillons de sérum, de plasma et de liquides apparentés de souris.

Principes expérimentaux

Ce kit utilise la méthode sandwich à double anticorps pour déterminer les niveaux de facteur de croissance épidermique (EGF) chez la souris dans les échantillons. Un anticorps purifié de facteur de croissance épidermique de souris (EGF) a été encapsulé dans une microplaque pour former un anticorps en phase solide, dans lequel le facteur de croissance épidermique (EGF) a été ajouté à la microplaque encapsulée dans le monomab, puis combiné avec un anticorps de facteur de croissance épidermique (EGF) marqué HRP pour former un complexe anticorps - antigène - enzyme anticorps marqueur qui a été coloré par le substrat TMB après un lavage cher - fond. Le TMB est converti en bleu sous la catalyse de l'enzyme HRP et en jaune final sous l'action de l'acide. La nuance de couleur et le facteur de croissance épidermique (EGF) dans l'échantillon étaient positivement corrélés. L'Absorbance (valeur OD) a été déterminée à l'aide d'un étalon enzymatique à une longueur d'onde de 450 nm et la concentration en facteur de croissance épidermique (EGF) de souris dans l'échantillon a été calculée à l'aide d'une courbe standard.

Exigences relatives aux spécimens

1. L'extraction est effectuée le plus tôt possible après la collecte des spécimens, l'extraction est effectuée conformément à la littérature pertinente, l'expérience doit être effectuée dès que possible après l'extraction. Si le test ne peut pas être effectué immédiatement, les spécimens peuvent être conservés à - 20 ° C, mais la congélation et la dégel répétés doivent être évités.

Les échantillons contenant nan3 ne peuvent pas être détectés, car nan3 inhibe l'activité de la peroxydase de raifort (HRP).

étapes de fonctionnement

1. Dilution des étalons: Ce kit fournit un étalon primitif, l'utilisateur peut effectuer la dilution dans un petit tube en suivant le diagramme ci - dessous.

2.sampling: Placez des trous vides séparément (les trous de contrôle vides n'ajoutent pas l'échantillon et le réactif de référence d'enzyme, les étapes restantes fonctionnent de la même manière), des trous standard, des trous d'échantillon à tester. Dans le paquet d'étalon d'enzyme est dosé avec précision 50 μl de l'étalon sur la plaque, dans le puits de l'échantillon à tester est d'abord ajouté 40 μl de dilution de l'échantillon, puis 10 μl de l'échantillon à tester (la dilution finale de l'échantillon est de 5 fois). Ajouter l'échantillon au fond du trou de la plaque de marquage enzymatique, essayez de ne pas toucher la paroi du trou, agitez doucement et mélangez.

3. Incubation: incuber à 37 ℃ pendant 30 minutes après avoir scellé la plaque avec un film de plaque.

4. Liquide de dosage: réserve de lavage concentré 30X après dilution avec de l'eau distillée 30X

5. Lavage: Retirez soigneusement le film de la plaque d'étanchéité, jetez le liquide, égouttez, remplissez chaque trou avec le liquide de lavage, laissez reposer 30 secondes après l'égouttage, répétez ainsi 5 fois, battez le sec.

6. Ajouter l'enzyme: ajouter 50 μl de réactif d'étalon d'enzyme par puits, à l'exception des puits vides.

7. Incubation: même opération 3.

8. Lavage: même opération 5.

9. Rendu des couleurs: chaque trou d'abord ajouter l'agent de rendu des couleurs A50 μl, puis l'agent de rendu des couleurs B50 μl, mélanger légèrement sous agitation, 37 ℃ éviter le rendu de la lumière pendant 10 minutes.

10. Terminaison: ajouter 50 μl de liquide de terminaison par puits pour mettre fin à la réaction (à ce moment - là, le bleu tourne vers le jaune).

11. Détermination: l'Absorbance (valeur OD) de chaque trou est mesurée dans l'ordre séquentiel à la longueur d'onde de 450 nm et à zéro dans les trous blancs. Le dosage doit être effectué dans les 15 minutes suivant l'addition du liquide de terminaison.

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