A498 milieu de culture spécifique pour cellules de cancer du rein humain instructions

Introduction au produit:

Le milieu spécifique aux cellules a - 498 a été soigneusement optimisé par l'équipe technique et, après des tests à long terme, ce produit maintient un excellent état de croissance des cellules a - 498. Les différents ingrédients nécessaires à la croissance des cellules a - 498 sont déjà inclus dans ce produit, sans ajout d'ingrédients, et peuvent être utilisés directement dans la culture in vitro des cellules a - 498. Ce produit est destiné à une utilisation scientifique ultérieure et ne doit pas être utilisé à des fins diagnostiques, thérapeutiques, cliniques, domestiques ou autres.

Étapes spécifiques de la culture cellulaire:

I. Équipement commun

1. Équipement de la salle de préparation

Distillateur d'eau à distillation unique, distillateur d'eau à double distillation, cylindre à acide, four, autocuiseur, armoire de rangement (pour placer les articles non stérilisés), armoire de rangement (pour placer les articles stérilisés), table d'emballage. Equipement de la Chambre de distribution: Balance de torsion et balance électronique (pesage de produits pharmaceutiques),PHCompteur (mesure du liquide de culturePHValeurs), agitateur magnétique (configuration de la Chambre de solution pour agiter la solution).

2. Équipement de la Chambre de culture

Réservoir d'azote liquide, armoire de rangement (rangement des encombrements), lampes solaires et UV, système de purification d'air, réfrigérateur cryogénique (-80℃), air conditionné, bouteille de CO2, table latérale (pour écrire des notes expérimentales).

3. Équipement qui doit être placé dans une chambre stérile

Centrifugeuse (collecte des cellules), table ultra - propre, microscope inversé,CO2Incubateur (incubation des cultures), bain - Marie, stérilisateur trioxy,4℃Réfrigérateur (placersérumEt fluides de culture).

II. Fonctionnement stérile

(i) stérilisation des chambres stériles

1.Nettoyage régulier de la salle stérile: nettoyer une fois par semaine, d'abord en faisant glisser le sol avec de l'eau courante, en essuyant la table, en nettoyant la table, etc., puis en utilisant3 ‰Venez sur ou Neuchâtel ou0.5% acide peroxyacétique essuyer.

2.CO2Incubateur (incubateur) stérilisation: d'abord avec3 ‰New caler essuyez, puis utilisez75% d'alcool à essuyer ou0.5% d'acide peracétique, irradier à nouveau avec une lampe UV.

3.Stérilisation avant l'expérience: allumer la lampe UV, stérilisateur trioxy, système de purificateur d'air chacun20 - 30Minutes.

4.Stérilisation post - expérimentale: avec75% d'alcool (3 ‰Neocell éteint) essuyez la table ultra - propre, la table latérale, la table porteuse du microscope inversé.

Méthodes de culture cellulaire:

01 Étapes opératoires de culture primaire

Les étapes opératoires de la culture primaire sont: extraction→Séparation→Cultiver.

（1Matériaux: il existe différentes méthodes d'approvisionnement pour différents tissus, mais tous doivent garder le matériau frais et strictement stérile.

Les étapes opératoires de culture cellulaire par passage sont les suivantes:

（1), la morphologie cellulaire et la densité de croissance sont observées sous un microscope inversé avant le passage, lorsque la densité de croissance cellulaire atteint80% ~ 90%Quand, il est possible de passer.

（2), aspirer ou verser le liquide de culture contenu dans le flacon de culture. AdhérerPBSNettoyage1 ~ 2Une fois, secouez doucement à gauche et à droite et abandonnez.

（3) Ajouter la quantité appropriée à l'intérieur du flacon en fonction de la taille du flacon de cultureEDTAOui, le fond entier du flacon de culture doit généralement être couvert.

（4) Mettre le flacon de culture37℃ CO2Incubateur pour la digestion,2 ~ 5minAprès avoir sorti placé sous un microscope inversé pour l'observation, quand il a été constaté qu'il y avait70% ~ 80%Lorsque les contractions cellulaires deviennent rondes et que les interstices cellulaires deviennent plus grands, un autre tapotement doux du flacon de culture fait tomber les cellules restantes et les ajoute immédiatement.2Une quantité multipliée de liquide de culture interrompt la digestion, en utilisant une tête d'aspiration pour souffler doucement et bien mélanger pour éviter une digestion excessive.

（5), aspirer toute la suspension cellulaire à l'intérieur du tube de centrifugation,1000 tours/minCentrifugation3 ~ 5min- Oui.

（6), défaussez le limpide, ajoutez la bonne quantité de solution de culture pour remettre les cellules en suspension, soufflez doucement et mélangez, de sorte que les cellules se dispersent uniformément.

（7), aspirer la bonne quantité de suspension cellulaire avec la tête d'aspiration, ensemencer avec une densité appropriée dans un nouveau flacon de culture, compléter le liquide de culture, bien agiter, placer dans37℃ CO2La culture est effectuée dans un incubateur.

（8), déterminer le temps de permutation ou de passage en fonction de l'état de croissance cellulaire ou même effectuer une lyophilisation cellulaire.

Précautions:

（1), strictement stérile, tous les réactifs et consommables utilisés doivent être stériles et doivent être irradiés par ultraviolet dans un plan de travail stérile ultra - net30 minutesCi - dessus, afin de ne pas contaminer les cellules.

（2), le fluide de culture utilisé doit être adapté à la survie et à la croissance des cellules. Provenant de cellules de différentes espèces animales, types de tissus, les exigences pour les fluides de culture ne sont pas les mêmes et, si nécessaire, des méthodes pré - expérimentales sont disponibles pour sélectionner les fluides de culture appropriés.

（3), le sérum de veau foetal joue un rôle clé dans le maintien de la survie cellulaire et la promotion de la croissance cellulaire. Le sérum de veau foetal approprié peut être sélectionné selon la littérature ou des pré - expériences. Une fois déterminé, il doit être conservé jusqu'à la fin de l'expérience.

（4Lors de la digestion des cellules, il faut éviter que le temps de digestion trop court ne provoque pas de digestion, que le nombre de cellules collectées soit faible, ou que le temps de digestion trop long entraîne la formation d'amas de cellules comme des flocs libres, lorsque les cellules ont été endommagées ou meurent, affectant le nombre de cellules et le progrès de l'expérience.

（5), lors de la centrifugation des cellules, il convient d'éviter que la force centrifuge trop petite collecte un nombre insuffisant de cellules, ou que la force centrifuge trop grande provoque des dommages aux cellules. Après la centrifugation de la précipitation cellulaire défaussée après le nettoyage, la précipitation cellulaire doit d'abord être dispersée, puis ajoutée à la suspension de culture, de sorte que moins de dommages cellulaires que le soufflage direct peut améliorer la viabilité cellulaire.

（6), la production de cellules doit être évitée autant que possible lors du soufflage des cellules afin de ne pas endommager les cellules et d'affecter l'état des cellules (une partie résiduelle du liquide pendant le soufflage à l'intérieur de la tête d'aspiration peut réduire la production de bulles d'air).

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