Milieu spécialisé pour les fibroblastes thymiques primaires de rat

Description des marchandises:

Soigneusement optimisé par l'équipe et testé sur le long terme, ce produit maintient les fibroblastes thymiques primaires de rat en bon état de croissance.

Divers ingrédients nécessaires à la croissance des fibroblastes thymiques primaires de rat ont été inclus dans ce produit, sans ajout d'ingrédients, qui peut être cultivé directement avec des fibroblastes thymiques primaires de rat.

Principaux ingrédients du produit

Transport et conservation

Transport:Placé dans un incubateur contenant des sacs de bio - glace pour le transport à basse température

保存方法: conserver 12 mois selon les conditions de conservation correspondantes, le milieu de culture configuré 2 ℃ ~ 8 ℃, conserver 2 mois;

Contrôle qualité

Précautions:

Pour la recherche scientifique seulement.

Certains composants du système de culture sont des substances nocives pour la santé humaine, veuillez ne pas toucher le liquide du système de culture et l'intérieur du récipient avec des résidus de liquide du système de culture avec la peau exposée; La concentration et la nocivité de cette partie de la substance nocive sont faibles, en cas de contact, il suffit de rincer immédiatement à l'eau du robinet.

Étapes de culture cellulaire:

Préparation du milieu de culture et des conditions de congélation:

1) Préparation du milieu dmem - H (ajout de NaHCO 3 1,5 g / l), 90%; Sérum de veau foetal, 10%. Le milieu de suspension peut également être choisi selon les besoins expérimentaux pour permettre aux cellules 293t de croître en suspension.

2) conditions de culture: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%. Température: 37 degrés Celsius, l'humidité de l'incubateur est de 70% - 80%.

3) lyophilisat: milieu de culture à 90%, DMSO à 10%, maintenant adapté. Stockage d'azote liquide.

II. Traitement cellulaire:

1) réanimer les cellules: décongeler le lyseur contenant 1 ml de suspension cellulaire en agitant rapidement dans un bain - Marie à 37 ° C, ajouter 4 ml de milieu de culture et bien mélanger. Centrifuger 4 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 - 2 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite ajoutées au flacon de culture pour une nuit de culture (ou la suspension cellulaire est ajoutée à une boîte de 10 cm, environ 8 ml de milieu sont ajoutés pour une nuit de culture). Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.

2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

Pour les cellules adhérentes, le passage peut se référer aux méthodes suivantes:

1. Jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

Ajouter 2 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,53 mm EDTA) dans un flacon de culture, placer dans un incubateur à 37 ° C pour la digestion pendant 1 - 2 minutes, puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après avoir ajouté une petite quantité de milieu pour terminer la digestion.

3. Appuyez sur 6 - 8 ml / flacon pour compléter le milieu de culture, bien agiter et bien aspirer, centrifuger à 1000 RPM pendant 4 minutes, retirer le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de milieu de culture et bien souffler.

4. Distribuer la suspension cellulaire dans de nouvelles boîtes contenant 8 ml de milieu ou dans des flacons dans un rapport de 1: 2 à 1: 5.

3) lyophilisation cellulaire: la lyophilisation cellulaire peut être effectuée lorsque la croissance cellulaire est en bon état. Lorsque les cellules collées sont congelées, une petite quantité est ajoutée après l'abandon du milieu de culture, après que les cellules deviennent rondes et tombent, environ 1 ml de milieu contenant du sérum est ajouté au lyophilisateur, puis 10% de DMSO est ajouté.

Méthode de Cryoconservation des cellules?

Méthode de Cryoconservation I: le tube de congélation est placé à 4 ℃ 30 ~ 60 minutes → (- 20 ℃ 30 minutes *) → - 80 ℃ 16 ~ 18 heures (ou toute la nuit) → réservoir d'azote liquide VaporPhase stockage à long terme.

Méthode de Cryoconservation II: le tube de congélation est placé dans le refroidisseur Programmable du programme défini, chaque minute tombe de 1 - 3 ℃ à - 80 ℃, puis dans le réservoir d'azote liquide Vapor phase de stockage à long terme. - 20 ℃ ne peut pas être plus d'une heure pour empêcher les cristaux de glace trop gros, provoquant la mort massive des cellules, ou sauter cette étape directement dans le réfrigérateur à - 80 ℃, mais la survie est légèrement réduite.

Produits vendus par la société:

1) Préchauffer le milieu dans un bain - Marie à 37 ° C; Préparer un tube à centrifuger stérile de 15 ml et ajouter 8 ml de milieu préchauffé.

2) retirez les cellules de lyophilisation du réservoir d'azote liquide, mettez - les rapidement dans un bain - Marie 37 ℃ et réchauffez - les (un bécher propre peut être préparé, rempli d'eau 37 ℃, le lyophilisateur cellulaire est retiré et rapidement mis dans le bécher, puis transféré progressivement dans un bain - Marie). Agiter doucement le tube de congélation de sorte que les cellules peuvent décongeler en 1 ~ 2 minutes, de sorte que les cellules peuvent passer la Section de température facilement endommagée (- 5 ~ 0 ℃) dès que possible. Notez que l'orifice du tube de congélation ne peut pas être immergé dans l'eau pour éviter de causer de la pollution.

3) essuyez le lyophilisateur avec de l'alcool à 75% avant de le placer dans une table ultra - propre, Transférez les cellules à l'intérieur du tube à l'intérieur du tube de centrifugation préparé, soufflez doucement le liquide pour que les cellules se dispersent uniformément, réduisez la concentration en DMSO et évitez de créer des bulles d'air lors du soufflage. Laver la paroi du tube 2 fois avec du milieu frais, tous transférés à l'intérieur du tube de centrifugation.

4) centrifuger à 800 RPM pendant 5 min, abandonner le surnageant, ajouter du milieu frais et souffler pour faire une suspension cellulaire.

5) Transférez la suspension cellulaire à l'intérieur du flacon de cellules t25, Complétez avec la bonne quantité de milieu, agitez doucement le flacon de cellules pour que les cellules soient distribuées uniformément et mettez - le dans un incubateur pour la culture.

6) Observez la croissance de la paroi cellulaire le lendemain, changez le milieu frais pour éliminer les cellules mortes. Continuer la culture, à la croissance des cellules à 80 ~ 90% de confluence lorsque le passage normal. Généralement, les cellules fraîchement réanimées doivent passer par 2 à 3 passages, et la viabilité cellulaire est rétablie avant d'effectuer des expériences ultérieures.