Nettoyant Mixed Flora biofilm Cleaning Validation

Docteur YongNettoyant Mixed Flora biofilm Cleaning Validation

Nettoyant Mixed Flora biofilm Cleaning ValidationPour:Dans le domaine médical, le problème des infections causées par les biofilms est de plus en plus critique, tandis que les biofilms de la flore mixte, en raison de leur complexité structurelle et de leur résistance aux médicaments, sont devenus un point difficile pour le contrôle des infections nosocomiales. Des études ont montré que les biofilms de la flore mixte peuvent augmenter la résistance bactérienne de plus de 1 000 fois, ce qui entraîne un risque huit fois plus élevé d'échec de stérilisation. Les données de surveillance de la Commission nationale de la santé Jian pour 2023 montrent que 23% des infections chirurgicales liées aux armes à feu sont directement liées aux résidus de biofilm, dont 62% de biofilms de flore mixte. Par conséquent, la vérification scientifique et précise de l'effet de nettoyage du biofilm de la flore mixte de l'agent de nettoyage médical Yong devient un lien essentiel pour garantir la sécurité des soins de santé.

Actuellement, le système de normes internationales pour la validation du nettoyage des biofilms de la flore mixte est progressivement amélioré.

ISO 18471: 2023, Évaluation de l'efficacité de la clairance du biofilm de microflore mixte stérilisé pour les dispositifs médicaux, établit un système d'essai spécifique, exigeant que la clairance du biofilm de microflore mixte chirurgical Qi atteigne 99,99%, et que les instruments à tube nécessitent une réduction de log ≥ 5,0; Notre GB / t 38502 - 2020 "Medical Qi Mechanical biofilm Performance Assessment Method for antimicrobial agents" spécifie en outre que l'utilisation d'un support en acier inoxydable 316L (rugosité de surface ra 0,8 - 1,6 μm) pour préparer un biofilm standard, la quantité initiale de bactéries doit être contrôlée à 5 - 7 log CFU / cm². Yy / t 0734.4 - 2025 Medical Yong Cleaner Part 4: Mixed biofilm clearance assay, mis en œuvre en 2025 l'introduction innovante de la technologie combinée "fluorescence in situ hybridation (FISH) Identification des souches + comptage sélectif des cultures" améliore considérablement la spécificité et la précision de la détection de la flore mixte.

Le cœur de la validation du nettoyage des biofilms de la flore mixte réside dans la construction de modèles de biofilms standard proches de la réalité clinique. En référence à la proportion de souches isolées cliniquement, l'inoculation a été réalisée avec un mélange de 3: 3: 2: 2 de S. aureus (ATCC 25923), E. coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) et Candida albicans (ATCC 10231). Le processus de préparation spécifique est: gravure du support en acier inoxydable 316L (10mm x 10mm) sur une solution d'acide nitrique à 5% pendant 30 minutes, stérilisation après nettoyage aux ultrasons; Une suspension bactérienne mixte (concentration 1 x 10 ⁸ UFC / ML) a été préparée avec du milieu TSB (contenant 10% de sérum de veau foetal), le support a été immergé dans le liquide bactérien et après 24 heures de culture au repos à 37°c, il a été transformé en culture dynamique en flux plus (débit 0,5 ml / min) pendant 72 heures, formant un biofilm mature (épaisseur 20 - 30 µm, nombre de bactéries vivantes 6 - 7 log UFC / cm²).

Méthode de détection utilisant un système de vérification à trois niveaux « qualitatif - quantitatif - différentiel»- Oui.

Le dépistage rapide a d'abord été effectué par biofluorescence ATP, avec un balayage aller - retour à l'aide d'une tige d'échantillonnage hygiena systemsure plus sur une zone de 10 cm² de la surface du support, avec une limite de détection allant jusqu'à 1 × 10 cm³ CFU / cm², les résultats étant exprimés en unités de lumière relative (ULR) et un seuil fixé à ≤ 250 ULR a été jugé provisoirement satisfaisant. Pour les échantillons ATP positifs, un comptage sélectif des cultures est effectué: après élution du support par ultrasons (puissance 300 W, fréquence 40 kHz, durée 20 min), le milieu TSA (culture aérobie à 37°c pendant 48 h, comptage du nombre total de bactéries) et le milieu SDA (culture à 28°c pendant 72 H, comptage du nombre de champignons) sont inoculés respectivement, tandis que les souches résiduelles sont identifiées par la technique fish - contre S. aureus (séquence sonde 5 '- GCT TTC CCT tgc GCT - 3'), E. coli (5 '- ggt tta CCA Agt TTC CGT GCT - 3'), pseudophyllus aeruginosa des sondes fluorescentes spécifiques ont été conçues par monas (5 '- Act tgc CGT TCC TTC GGC t - 3') et Candida albicans (5 '- TCC TCC AAT CCG tta CAG - 3') pour observer la distribution des souches en microscopie confocale laser (longueur d'onde d'excitation 488 nm / 561 nm, pas de 0,5 µm dans l'axe Z).

La configuration de l'instrument de détection critique doit répondre aux besoins d'analyse multidimensionnelle.

L'équipement de base comprend: Le Microscope confocal laser Olympus fv3000 (équipé du mode airyscan ultra haute résolution), le détecteur ATP Clean - trace 3M (plage de détection 0 - 9999 rlu), l'enzyme multifonction varioskan Lux de symerfly (pour la détermination de l'activité métabolique xtt). Les équipements auxiliaires comprennent: nettoyeur ultrasonique Branson cpx3800 (contrôle de la température ± 1 ° c), armoire de sécurité biologique Esco class II, PH - mètre Mettler sevencompact. Il est particulièrement important de noter que l'échantillon doit être fixé avec 4% de paraformaldéhyde avant la détection Fish, la température d'hybridation est contrôlée à 46 ℃ ± 0,5 ℃, la concentration de la sonde est strictement contrôlée (50 ng / μl) et le temps d'hybridation (16 h).

Les résultats ont été jugés conformes au « système de classement »: la classe I (implants) exige une clairance totale de la flore mixte ≥ 99,99% (valeur de réduction du log ≥ 4,0) et une clairance ≥ 99,99% pour chaque souche; Classe II (endoscopie) clairance totale ≥ 99,9% (valeur de réduction du log ≥ 3,0), clairance fongique ≥ 99%; La classe III (dispositifs conventionnels) a une clairance totale ≥ 99% pour être jugée admissible. Les résultats de la vérification des capacités 2024 de l'Institut chinois d'inspection des aliments et des médicaments ont montré que seulement 7 des 18 laboratoires pouvaient compléter avec précision l'identification de la microflore mixte, la principale source d'erreur étant l'interférence croisée entre les champignons et les bactéries (le mycélium Candida peut facilement envelopper les bactéries pour former une « coquille protectrice»). L'ajout d'un prétraitement à la Chitinase de 0,1% au moment de la détection est recommandé pour augmenter l'efficacité de dispersion du biofilm fongique de 40%.

Dans les applications pratiques, la simulation des conditions de contamination clinique est essentielle pour assurer l'efficacité des tests. Des études ont montré que l'ajout de 10% de protéines sériques humaines augmente la résistance du biofilm mixte de 50%, et il est recommandé que la formule de liquide contaminant soit préparée dans le rapport « suspension bactérienne mixte à 80% + Fluide corporel simulé à 20% (contenant 3% d'albumine, 0,5% de mucine) ». Pour les instruments à tube, il est nécessaire d'utiliser un "réacteur à biofilm à circulation" (diamètre intérieur 2 mm, longueur 30 cm), avec un débit contrôlé de 1 ml / min par une pompe péristaltique, formant un biofilm à gradient (épaisseur de la Section d'entrée 35 µm, Section de sortie 15 µm) à l'intérieur de la cavité, plus proche de l'état de contamination clinique réelle.

La validation du nettoyage biofilm de la flore mixte est devenueDocteur YongLa « norme d'or» pour l'évaluation des performances des agents de nettoyage.

Grâce à l'intégration de techniques multidimensionnelles de dépistage rapide de l'ATP, de comptage sélectif des cultures et d'identification des souches Fish, combinées à un système à deux normes ISO / GB, l'efficacité de nettoyage des biofilms complexes peut être évaluée de manière exhaustive. Les établissements de soins de santé devraient mettre en place un système de « classification des risques liés aux biofilms» pour mettre en œuvre des tests de biofilms à 100% sur les dispositifs à haut risque tels que les implants; Les entreprises de production de produits de nettoyage doivent optimiser le Protocole de recombinaison de la préparation enzymatique, et la plus récente étude a montré que la formule triple protéase + glycosidase + Chitinase augmente la clairance du biofilm de la flore mixte de 2,3 valeurs log. Avec la mise en œuvre complète de la norme GB 32630 - 2025, exigences communes pour les nettoyants médicaux, l'efficacité de l'élimination des biofilms de la flore mixte deviendra un indicateur clé de l'accès au marché, poussant l'industrie à passer d'un « nettoyage à large spectre» à une « élimination de précision des membranes».