Marque de fibroblastes embryonnaires de souris 3T3 - L1

Informations sur les marchandises:

Lyophilisat: 55% milieu de base + 40% FBS + 5% DMSO

Température: azote liquide

Protocole de culture a (par défaut)Pour:Milieu de croissance: dmem + 10% NCS + 1% P / s

Conditions de culture:Phase gazeuse: air, 95%; CO2， 5%, température: 37℃

Proportion de générations recommandée1: 3 - 1: 4

Description du contexteLes cellules 3T3 - L1 sont des sous - souches successives de 3T3 (souris blanches suisses) obtenues par isolement Clonal. Lorsque les cellules 3T3 - L1 passent de la Division rapide à la plénitude et que l'exposition est inhibée, les cellules 3T3 - L1 passent par la graisse antérieure à la graisse. Dans le liquide de culture, une teneur élevée en sérum peut favoriser l'accumulation de graisse dans les cellules 3T3 - L1.

Âge (sexe)Embryons

Types de cellulesCellules immortalisées spontanément

Niveau de biosécuritéBSL-1

Situation de l'expression des récepteursinsuline, exprimée

Institution de dépôtATCC; CL-173 ATCC; CCL-92.1BCRC; 6015

Transport et conservation:

Transport de glace sèche et réanimation de bonnes cellules viables

(1) 1ml conteneur de stockage de congélation pour le transport de la glace sèche, après réception - 80 degrés de conservation du réfrigérateur pendant la nuit après le transfert à l'azote liquide ou la réanimation directe, s'il s'avère que la glace sèche a été volatilisée propre, le bouchon du conteneur de stockage de congélation est tombé, cassé et les cellules sont contaminées, s'il vous plaît contactez - nous immédiatement.

(2) Les cellules viables réanimées par le flacon t25 sont expédiées à température normale, après réception, en suivant la méthode de traitement après réception cellulaire.

Traitement après réception cellulaire:

1) après avoir reçu les cellules, la paroi de la bouteille de désinfection de l'alcool à 75% place la bouteille t25 dans l'incubateur à 37 ℃ pendant environ 2 - 3H, si vous trouvez la bouteille de culture cassée, il y a un déversement de liquide et la contamination des cellules, s'il vous plaît contactez - nous rapidement après avoir pris des photos.

2) s'il vous plaît confirmer l'état des cellules sous un microscope 4 ou 5X, tout en prenant des photos des cellules fraîchement reçues (10 ×, 20 ×) 2 - 3 de chaque ainsi qu'une photo de l'apparence du flacon de culture à retenir comme base de l'état des cellules au moment de la réception Après - vente.

3) cellules collées: les cellules sont placées dans l'incubateur à 37 ℃ pendant 2 - 3H, sous le microscope pour observer la croissance des cellules et l'application de la condition, certaines cellules collées dans le processus d'expédition Express tomberont en raison de la vibration et de la condition de la masse après la chute. Si la densité de croissance des cellules observées sous miroir est inférieure à 60%, le milieu de perfusion peut être retiré du flacon de culture (s'il y a des cellules non collées qui doivent être récupérées par centrifugation, remises en suspension dans le flacon de culture d'origine), ajouter le milieu nouvellement formulé 6 - 8 ml, mettre dans l'incubateur de cellules pour poursuivre la culture. Si la densité de croissance cellulaire est supérieure à 70% - 80%, les cellules peuvent être traitées par passage. Pendant le passage, si les cellules tombées en raison des vibrations de transport doivent être récupérées par centrifugation.

Traitement cellulaire:

1) réanimation des cellules lyophilisées:

Le lyophilisateur contenant 1 ml de suspension cellulaire est décongelé sous agitation rapide dans un bain - Marie à 37°c, ajouté à un tube à centrifuger contenant 4 à 6 ml de milieu pour bien mélanger. Centrifuger à 1000 RPM pendant 3 - 5 min, éliminer le surnageant et remettre les cellules en suspension dans le milieu. La suspension cellulaire est ensuite ajoutée à des flacons (ou boîtes) contenant 6 - 8 ml de milieu pour incubation à 37°c pendant une nuit. La croissance cellulaire et la densité cellulaire sont observées au microscope le lendemain.

2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

Pour le passage de cellules adhérentes, on peut se référer aux méthodes suivantes:

1. Jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

Ajouter 0,25% (P / v) - 0,53 mm EDTA dans un flacon de culture (flacon t25 1 - 2 ml, flacon T75 2 - 3 mL), placer dans un incubateur à 37 ° C pendant 1 - 2 minutes pour la digestion (les cellules difficiles à digérer peuvent prolonger correctement le temps de digestion), puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après ajouter 3 - 4 ml de milieu contenant 10% de FBS pour terminer la digestion.

3. Bien mélanger doucement et bien aspirer, centrifuger à 1000 RPM pendant 3 - 5 min, jeter le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de solution de culture et bien souffler. La suspension cellulaire est divisée dans de nouveaux flacons t25 dans un rapport de 1: 2, 6 - 8 ml de nouveau milieu configuré selon les instructions sont ajoutés pour maintenir la viabilité de croissance des cellules, et les passages suivants sont effectués dans un rapport de 1: 2 ~ 1: 5 selon la réalité.

3) lyophilisation cellulaire: après réception des cellules, il est recommandé de lyophiliser un lot de semences cellulaires pour une utilisation expérimentale ultérieure au cours des 3 premières générations de culture.

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