Kit de détection de prolifération cellulaire cell Counting Kit - 8

Kit de multiplication cellulaire cell Counting Kit - 8 (CCK - 8)

Numéro de produit: c6005m

Spécifications du produit: 500T

Conditions de stockage:4℃Conservation à l'abri de la lumière, stockage à long terme placé-20℃，Date d'expiration voir emballage extérieur- Oui.

Introduction du produit:

Kit de comptage de cellules-8Court termeCCK8(ouWST-8), un kit, est basé surWST-8(nom chimique:2- (2 -Méthoxy- 4 -Nitrophényle) - 3 - (4 -Nitrophényle) - 5 - (2,4 -Disulfurobenzène-2H-Sel monosodique de tétrazole) La réaction de rendu des couleurs est largement utilisée dans les kits de détection rapide et très sensible de la prolifération cellulaire et de la Cytotoxicité.

WST-8Principe de fonctionnement: peut être réduit par la déshydrogénase à l'intérieur des mitochondries pour produire un produit jaune orangé hautement soluble dans l'eau, le méthylഐ, dans les conditions de présence d'un réactif de couplage électronique (formazan). La nuance de couleur est directement proportionnelle à la prolifération cellulaire et inversement proportionnelle à la Cytotoxicité. Utilisation d'un étalon enzymatique dans450 nmDétermination à la longueur d'ondeODValeur, reflétant indirectement le nombre de cellules vivantes.

WST-8OuiMTTUn produit de remplacement amélioré, etMTTOu autreMTTProduits similaires commeXTTEt,MTSEtc. a des avantages évidents par rapport à. D'abord,MTTLe méthyl 臜 produit par réduction de certaines déshydrogénases dans les mitochondries n'est pas soluble dans l'eau et nécessite une solution spécifique pour se dissoudre; EtWST-8Et,XTTEtMTSLe form 臜 produit est tous solubles dans l'eau et les étapes ultérieures de dissolution peuvent être omises. Deuxièmement,WST-8臜bi produitXTTEtMTSLe forma 臜 produit est plus soluble. Encore une fois,WST-8Plus queXTTEtMTSPlus stable, ce qui rend les résultats expérimentaux plus stables. En outre,WST-8AvecMTTEt,XTTPlus large et plus sensible que la plage linéaire.

CCKLa méthode est largement utilisée dans le dépistage de médicaments, les essais de prolifération cellulaire, les essais de Cytotoxicité, les tests de sensibilité aux médicaments tumoraux et la détection de l'activité des biofacteurs, entre autres aspects.

Mode d'emploi :

1. Détection de l'activité cellulaire

（1) dans96 Suspension cellulaire inoculée dans les plaques de puits (100 μL/heureTrous), il est recommandé que vous pouvez définir8 Gradient de concentration cellulaire, chaque réglage de concentration6 Une répétition du pavage cellulaire, par exemple en fonction du nombre de cellules0/312,5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cellules/96Plaque de trou pour le platelage. Incuber la plaque de culture dans un incubateur pendant la nuit (37℃,5 % de CO2).

（2) Ajouter à chaque trou10 μL de CCKSolutions (attention à ne pas créer de bulles dans les trous, elles peuvent affecterODLecture des valeurs). Remarque: si le produit est sorti, il peut37℃Traitement de bain d'eau, n'affecte pas l'utilisation.

（3), incuber la plaque de culture à l'intérieur de l'incubateur0,5 à 4 hRemarque: les premières expériences peuvent être effectuées dans0.5、1、2 Et4 heuresAprès avoir été détecté séparément avec un étalon enzymatique, un point temporel où la plage d'Absorbance est plus appropriée est ensuite sélectionné pour les expériences ultérieures.

（4), déterminée à l'aide d'un étalon enzymatique450 nmEt600 nmAbsorbance à (suppression des interférences de fond de plaque de pore). (5) Si temporairement non déterminéODValeur, peut être ajouté à chaque trou10 μL 0,1 MDeHClSolution ou1 % p/v SDSSolution et conserver la plaque de culture à l'abri de la lumière à température ambiante.24 heuresDétermination interne, l'Absorbance ne change pas.

2. Prolifération cellulaire - détection de toxicité

（1) dans96 Inoculation dans les plaques de trou100 μLSuspension cellulaire, recommandé peut être réglé8 Gradient de concentration cellulaire, chaque réglage de concentration6 Une répétition du pavage cellulaire, par exemple en fonction du nombre de cellules0/312,5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cellules/96Plaque de trou pour le platelage. Incuber la plaque de culture dans un incubateur pendant la nuit (37℃, 5%CO2) et

（2) Ajouter à la plaque de culture1 à 10 μLStimulation médicamenteuse spécifique.

（3), incuber dans l'incubateur pendant un certain temps (par exemple:6、12、24 Ou48 heures).

（4) Ajouter à chaque trou10 μL de CCKSolutions (attention à ne pas créer de bulles dans les trous, elles peuvent affecterODLecture des valeurs). Remarque: si le produit est sorti, il peut37℃Traitement de bain d'eau, n'affecte pas l'utilisation.

（5), incuber la plaque de culture à l'intérieur de l'incubateur0,5 à 4 hRemarque: les premières expériences peuvent être effectuées dans0.5、1、2 Et4 heuresAprès avoir été détecté séparément avec un étalon enzymatique, un point temporel où la plage d'Absorbance est plus appropriée est ensuite sélectionné pour les expériences ultérieures.

（6), déterminée à l'aide d'un étalon enzymatique450 nmEt600 nmAbsorbance à (suppression des interférences de fond de plaque de pore).

（7) Si temporairement non déterminéODValeur, peut être ajouté à chaque trou10 μL 0,1 MDeHClSolution ou1 % p/v SDSSolution, et couvrir la plaque de culture pour conserver à l'abri de la lumière dans des conditions de température ambiante.24 heuresDétermination interne, l'Absorbance ne change pas.

Note: si la matière à mesurer est oxydante ou réductrice, elle peut être ajoutéeCCKLe milieu frais a été préalablement remplacé (le milieu a été éliminé et les cellules ont été lavées deux fois avec le milieu, puis un nouveau milieu a été ajouté) pour éliminer les effets du médicament. Bien sûr, l'impact du médicament est relativement faible, il est possible de ne pas changer le milieu de culture, directement déduit de l'absorption du vide après l'ajout du médicament dans le milieu de culture.

3. Formule de calcul

Taux de survie cellulaire=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]xTaux d'inhibition=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]xComme :Trou expérimental(Milieu de culture contenant des cellules,CCK-8Médicaments à tester) etL 'AbsorbanceAc :Trou de contrôle(Milieu de culture contenant des cellules,CCK-8Pas de médicaments à tester) etL 'AbsorbanceAb :Trou vide(Milieu de culture sans cellules et sans médicament à tester,CCK-8)L 'Absorbance

Précautions

1. S'il vous plaît centrifuger momentanément le produit au fond du tube avant l'utilisation, puis effectuer des expériences ultérieures.

2. utiliser96Les puits sont soumis à un pavage cellulaire et si la culture est plus longue, assurez - vous de prêter attention aux problèmes d'évaporation. Il est recommandé d'abandonner l'approche d'un cercle autour, en ajoutant la même quantité dePBSDe l'eau ou du liquide de culture.

3. Assurez - vous qu'il n'y a pas de bulles d'air dans chaque puits avant de les détecter avec un étalon enzymatique, sinon cela interférera avec la détermination.

4. Ce produit est limité à la recherche scientifique, ne doit pas être utilisé pour le diagnostic clinique ou le traitement, ne doit pas être utilisé dans les aliments ou les médicaments, ne doit pas être stocké dans une résidence normale.

5. Pour votre sécurité et votre santé, portez une combinaison expérimentale et manipulez - la avec des gants jetables.