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Coenzyme Ⅰ NAD (h) contenu test cassette spectrophotométrie visible

NégociableMise à jour sur02/19

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Détails du produit

Rappel spécial: ce produit est destiné uniquement à la recherche scientifique et ne doit pas être utilisé pour des tests cliniques directs chez l'homme.

Nom du produit:Coenzyme Ⅰ NAD (h) contenu test cassette spectrophotométrie visible
Spécifications du produit: 50 tubes / 24 échantillons
Méthode de détection: spectrophotométrie visible
Numéro de produit: BK - 01s6322
Classification des produits:
Présentation des marchandises:

Détermination de la signification
La Coenzyme I NAD (h) est largement présente dans les animaux, les plantes, les micro - organismes et les cellules en culture, le NAD + est le principal récepteur de l'hydrogène pour la glycolyse (emp) et le cycle des acides tricarboxyliques (TCA), et le NADH résultant est transmis à l'oxygène par la chaîne électronique respiratoire (etc), qui forme de grandes quantités de Ros tout en synthétisant l'ATP, tandis que le NADH est régénéré en NAD +. La réaction d'oxydation dans la décomposition des trois substances métaboliques du sucre, des lipides et des protéines est en grande partie achevée par ce système. Les hauts et les bas de la teneur en NAD (h) et du rapport NADH / NAD + peuvent être utilisés pour évaluer la force et la faiblesse des cycles de glycolyse et de TCA. Des valeurs plus élevées de NAD (h) et de rapport NADH / NAD + indiquent une consommation d'oxygène respiratoire cellulaire plus élevée et un état de peroxydation. De plus, un rapport NADH / NAD + élevé peut également inhiber la glycolyse et le cycle TCA. En outre, les produits de dégradation du NAD + ont des effets régulateurs importants sur la signalisation cellulaire, le métabolisme et l'expression des gènes, entre autres.
Principe de détermination
Extraction du NAD + et du NADH respectivement dans l'échantillon avec des extraits acides et basiques, le NADH par hydrogénèse par PMS, le bleu de thiazole oxydé réduit (MTT) étant le méthylène, les valeurs d'absorption lumineuse étant détectées à 570 nm; Alors que le NAD + peut être réduit en NADH par l'éthanol déshydrogénase, il est en outre détecté par la méthode de réduction MTT.
Instruments et fournitures à apporter
Spectrophotomètre visible, centrifugeuse de table, pipette, verrerie de 1 ml, mortier, glace et eau distillée.

Instruments et fournitures nécessaires:

Spectrophotomètre visible, verre 1ml (diamètre 1cm), centrifugeuse cryogénique, pipette, mortier, glace et eau distillée

Iv. Détermination de la Superoxyde dismutase (SOD):

Il est recommandé de choisir 2 échantillons avant l'expérimentation formelle pour faire la prédiction, comprendre la situation de ce lot d'échantillons, se familiariser avec le processus expérimental, éviter l'expérimentation

Déchets d'échantillons et de réactifs!

1, préparation des échantillons

① échantillon de tissu:

Prenez environ 0,1 g de tissu (0,25 G est souhaitable pour un échantillon bien hydraté), ajoutez 1 ml de liquide d'extraction et faites - le à 4ºc ou dans un bain de glace.

Homogénateurs (ou utilisez divers homogénateurs courants). Centrifuger à 4ºc x 12000 tr / min pendant 10 min et prélever le surnageant comme liquide à mesurer.

[Remarque]: Si vous augmentez la taille de l'échantillon, l'extraction peut être effectuée en fonction de la masse de tissu (g): le volume de liquide d'extraction (ML) est de 1: 5 ~ 10

② échantillons de bactéries / cellules:

Collectez d'abord les bactéries ou les cellules à l'intérieur du tube de centrifugation, puis jetez - les; Prenez environ 5 millions de bactéries ou de cellules et ajoutez 1 mL

Le liquide d'extraction, les ultrasons brisent les bactéries ou les cellules (bain de glace, puissance 200W, ultrasons 3S, espacés de 10S, répété 30 fois);

12000 RPM 4 ℃ centrifuger pendant 10 min, enlever et mettre sur la glace à mesurer.

Remarque: Si vous augmentez la taille de l'échantillon, vous pouvez le faire en fonction du nombre de bactéries / cellules (10)

4): le liquide d'extraction (ML) est dans un rapport de 500 ~ 1000: 1 pour l'extraction. ③ échantillon liquide: détection directe; S'il est trouble, après centrifugation, prenez un test de débridement.

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Méthodologie expérimentale:
I. formulation de l'héparine:
Poudre lyophilisée d'héparine du commerce 140 unités / mg, bouteille de 1 G, chaque bouteille 140000 unités, peser 0,1 g de poudre lyophilisée d'héparine, ajouter de la saumure physiologique 5ml, ensemble 2800 unités / ML. Prenez 50 ~ 100μl de paroi du tube humide, peut anticoaguler le sang humain 3 ~ 5ml, le sang ne coagulera pas. Le sang des rats se coagule facilement, il est donc préférable de le rendre plus épais. Peut prendre 0,1 g de poudre lyophilisée d'héparine, ajouter 3 ml de solution saline physiologique après dissolution, prendre 50 à 100 μl, peut anticoaguler le sang de rat 2 à 4 ML.
Préparation du tube anticoagulant héparine: prendre 0,1 g de poudre lyophilisée d'héparine et ajouter 2,5 ml de solution saline physiologique. Prendre 100 μl ~ 150 μl goutte à goutte dans un tube en plastique ou en verre, humidifier la paroi du tube, en dessous de 80 ℃ dans un petit four (peut utiliser un petit four pour griller le pain), tourner latéralement, toutes les 5 ~ 10 minutes, jusqu'à ce qu'il soit sec et mis en conserve 4 ℃, peut faire 2 ~ 5 ml de sang non coagulé.
II. Collecte des échantillons de sang:
Le sang total est divisé en non - anticoagulant et anticoagulant selon les conditions dans lesquelles il est recueilli. Dans le même temps, ne pas anticoaguler le liquide jaune supérieur isolé que nous appelons le sérum; Anticoagulant isolé la couche supérieure jaune du liquide que nous appelons plasma.
1, sérum collecté sans Anticoagulation: le bon sang total sera recueilli, laissé reposer pendant 1 à 2 heures, centrifuger directement à basse vitesse pour séparer le saignement à utiliser ou à conserver.
2, anticoagulant pour recueillir le plasma: recueillir le sang total anticoagulant, après l'Anticoagulation adéquate doucement inversée, peut être centrifugé directement à basse vitesse pour séparer le plasma (peut également être laissé au repos pendant environ une demi - heure à nouveau centrifuger à basse vitesse pour séparer le plasma) pour être utilisé ou conservé. Selon les caractéristiques de performance des différents anticoagulants, les anticoagulants appropriés sont choisis. Les anticoagulants couramment utilisés en laboratoire sont divers sels d'héparine, EDTA et.
Choisissez les points d'attention pour l'Anticoagulation:
① la quantité d'anticoagulant ajoutée à chaque échantillon doit être cohérente, tandis que la quantité de sang total prise doit être aussi cohérente que possible;
②, après la collecte du sang total anticoagulant doit être doucement inversé, anticoagulant suffisamment pour empêcher une partie du sang de ne pas toucher l'anticoagulant et provoquer la coagulation;
③, sang total anticoagulant collecte relativement plus de plasma (1 ml de sang total anticoagulant peut isoler 0,4 à 0,5 ml de plasma);
④, anticoagulant collecte de plasma après Cryoconservation, la turbidité floconneuse peut apparaître lors de la décongélation, si nécessaire après la centrifugation pour enlever la turbidité
Pour la détermination.

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Cassette de test de créatine kinase (CK) Cassette de test de créatine kinase (CK) microméthode microméthode

Phospho GEF H1 (ser886) phosphate Rho guanylate Exchange Factor 2 anticorps

Phospho afadin (ser1721) anticorps phosphonated filamenteous Actin Binding Protein

Arpc1a Actin Associated Protein 2 / 3 isotype 1a anticorps

Ankrd32 Anchor Protein repeat Domain Protein 32 anticorps

Atxn7l3b ataxie 7 - like protein 3b anticorps

POP1 Infectious Protein White 1 anticorps

Asb5 contenant des séquences répétées de protéines d'ancrage - cytokine signal Inhibitor Box Protein Family 5 anticorps

Abp1 phytogrowth hormone abp1 anticorps

Phospho - atf2 (thr55) anticorps phospho - atf2 activé par réplication

Adra1b Alpha 1 adrénergique receptor B anticorps

BCL - 2 ALPHA BCL2 Alpha Protein anticorps

Bat5 leucocyte antigen B - related transcription Protein 5 anticorps

Btbd1 BTB / poz Domain Protein 1 (NS5A Transcript Protein 8 du virus de l'hépatite C) anticorps

Bcl7b anticorps contre la protéine bcl7b

Coenzyme Ⅰ NAD (h) contenu test cassette spectrophotométrie visibleBnc2 Alkaline nucleoprotein 2 (Zinc Finger Protein basonuclin2) anticorps

Bcl7c leucémie à cellules B / lymphome protéine 7 anticorps

Bscl2 anticorps contre la protéine 2 du trouble congénital du métabolisme des graisses (paraplégie spastique héréditaire autosomique dominante 17)

Btg1 B Cell Migration Gene 1 anticorps

Bean1 protéine d'Ataxie spinocérébelleuse bean1 anticorps

Précautions:

1, réactif deux enzymes, ne peut pas être congelé, placé sur la glace lors de l'utilisation.

2, il suffit de faire un tube pour les soins.

Si la valeur d'absorption lumineuse du soin est supérieure à 2, il est recommandé d'utiliser le réactif après dilution 7 fois avec de l'eau distillée (10 μl de réactif liquide + 60 μl d'eau distillée).

4, SOD Pourquoi y a - t - il un tube de détermination de l'échantillon plus grand que le soin, dans quelle gamme de valeurs du soin?

La gamme de soins est de 0,8 - 2. Une valeur d'absorption de lumière trop faible pour le soin peut être (1) réactif II ou réactif IV n'est pas disponible; (2) aucun réactif n'a été ajouté dans l'ordre; (3) le temps de réaction n'est pas suffisant, le temps de réaction peut être prolongé (le temps de réaction 30min peut être prolongé à 40min). Une valeur d'absorption de lumière trop élevée pour le soin peut être que le réactif II n'a pas été dilué par un multiple correspondant selon les instructions d'utilisation.

Si le tube de dosage apparaît plus grand que le soin, peut - être que l'impact des impuretés dans l'échantillon est trop grand, afin de réduire l'impact des impuretés généralement le surnageant d'extraction de l'échantillon est dilué avec de l'eau distillée ou du liquide d'extraction 10 fois plus tard, vous pouvez généralement rendre le dosage normal. Multipliez dans la formule de calcul le multiple de dilution correspondant.

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