Scc7 (cellules cancéreuses squameuses de souris)

I. propriétés fondamentales des cellules

Origine des tissus: carcinome épidermoïde

Caractéristiques de croissance: Wall Grow

Morphologie cellulaire: Cellule épithéliale comme

Les cellules de carcinome épidermoïde de souris scc7 sont des cellules obtenues à partir de tissus ou d'organes de l'organisme, de collagénase, d'autres méthodes et cultivées in vitro dans un environnement imitant l'organisme.

Niveau de biosécurité: 1

Spécifications cellulaires: flacon de culture 1 x 106cells / t25 ou emballage de lyophilisateur de 1ml

Milieu: 1640 + 10% FBS

Conditions de culture: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%. Température: 37 degrés Celsius, l'humidité de l'incubateur est de 70% - 80%.

Conditions de congélation: liquide de congélation: 90% FBS, 10% DMSO,

Temps de doublement: 2 à 3 fois par semaine

Ratio de génération: 1: 2 génération

Fréquence de changement de liquide: 2 - 3 jours pour changer une fois

II. Opérations de culture cellulaire

1) Cellules de réanimation: le traitement de lyophilisation de culture cellulaire suivant est pour référence seulement, les étapes d'opération spécifiques sont dominées par les instructions du produit livré avec

Le lyophilisateur contenant 1 ml de suspension cellulaire est décongelé en agitant rapidement dans un bain - Marie à 37°c, en ajoutant 4 ml de milieu de culture pour bien mélanger. Centrifuger 3 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 - 2 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite mises à incuber pendant une nuit dans des flacons de culture contenant la quantité appropriée de milieu (ou dans des boîtes de 6 cm, ajouter environ 4 ml de milieu et mettre à incuber pendant une nuit). Changez de liquide le troisième jour et vérifiez la densité cellulaire.

2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

a、 Lorsque les cellules sont cultivées jusqu'à couvrir 80% de la surface du flacon de culture, jeter le liquide de culture dans le flacon de culture de 25 cm 2 et laver les cellules une fois avec du PBS;

b、 Ajouter environ 1 ml de digestat à 0,25% dans le flacon de culture, observer au microscope inversé, ajouter le digestat après que les cellules à rétracter soient arrondies pour terminer la digestion, puis souffler doucement les cellules pour les faire tomber, puis transférer la suspension dans un tube à centrifuger de 15 ml, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min;

c、 Abandonner le surnageant, remettre les cellules précipitées en suspension avec 12 ml de milieu, puis passer en flacons à raison de 1: 2 et enfin mettre en culture dans un incubateur de cellules CO 2 à 5% à 37°c;

d、 Après application des cellules, on observe les résultats de la culture, après quoi on effectue une culture de fluidification ou un passage.

3) lyophilisation cellulaire: la lyophilisation cellulaire peut être effectuée lorsque la croissance cellulaire est en bon état. La bouteille t25 ci - dessous à titre d'exemple;

a、 Lorsque les cellules sont cultivées jusqu'à couvrir 80% de la surface du flacon de culture, jeter le liquide de culture dans le flacon de culture de 25 cm 2 et laver les cellules une fois avec du PBS;

b、 Ajouter environ 1 ml de digestat à 0,25% dans le flacon de culture, observer au microscope inversé, ajouter le digestat après la rétraction des cellules à arrondir pour terminer la digestion, souffler doucement les cellules pour les faire tomber, puis transférer la suspension dans un tube à centrifuger de 15 ml, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min;

c、 Remettre les cellules en suspension avec une quantité appropriée de lyophilisat (FBS: DMSO = 9: 1) et les placer dans un lyophilisateur;

d、 Les lyophilisateurs cellulaires ont d'abord été placés à - 20 ° C pendant 1,5 H, puis déplacés à - 80 ° C pendant une nuit, puis transférés dans l'azote liquide pour une conservation à long terme après 24 h. L'utilisation de la boîte de refroidissement du programme peut être placée directement à - 80 ° c.

Iii. Précautions de culture

1. Après avoir reçu les cellules, observez d'abord si la bouteille de cellules est en bon état, si le liquide de culture a des fuites, des troubles et d'autres phénomènes, si l'un des phénomènes ci - dessus se produit, veuillez nous contacter à temps.

2. Lisez attentivement les instructions de la cellule pour comprendre les informations relatives aux cellules, telles que la morphologie cellulaire, le milieu de culture utilisé, la proportion de sérum, les Cytokines requises, etc., pour vous assurer que les conditions de culture cellulaire sont cohérentes, si des problèmes surviennent avec les cellules en raison de conditions de Culture incohérentes, la responsabilité incombe au client lui - même.

3. Essuyez la surface du flacon cellulaire avec de l'alcool à 75% et observez l'état des cellules au microscope. En raison de problèmes de transport, certaines cellules en raison des changements de température et des chocs violents pour former des fragments, est un phénomène normal. Après avoir observé le bon état cellulaire, la paroi du flacon stérilisé à 75% d'alcool a placé le flacon t25 dans un incubateur à 37 ° C pendant 2 à 4 heures.

4. Les cellules adhérentes peuvent être digérées, les cellules en suspension mélangent directement les cellules de collecte, 900 RPM - 1000 RPM centrifuger pendant 3 minutes, abandonner le surnageant. Ajouter 5 ml de cellules PBS resuspendues, centrifuger encore 900 RPM - 1000 RPM pendant 3 min, resuspendre les cellules avec du milieu frais et ensemencer dans de nouveaux flacons ou boîtes de pétri, placer dans l'incubateur pour la culture.

5. Demandez au client d'utiliser le milieu de culture dans les mêmes conditions pour la culture cellulaire.

6. Il est recommandé aux clients de prendre plusieurs photos de cellules chacun pendant les 3 premiers jours après la réception des cellules, d'enregistrer l'état des cellules, de faciliter la communication et la communication avec notre département technique. En raison du transport, des conditions instables peuvent survenir dans les cellules sensibles individuelles, veuillez nous contacter à temps pour nous informer des spécificités des cellules afin que nos techniciens puissent suivre les visites de retour jusqu'à ce que le problème soit résolu.

7. La cellule est pour l'usage scientifique seulement.

8. Remarque: le milieu de culture utilisé pour le transport (milieu de culture de perfusion) ne peut plus être utilisé pour cultiver les cellules, veuillez remplacer le milieu de culture nouvellement formulé conformément aux conditions de culture cellulaire des instructions pour cultiver les cellules. Premier passage après réception des cellules Recommandation 1: 2 passage.

Note: 1: 2 générations est 1 bouteille t25 pour 2 bouteilles t25 ou 2 boîtes de 6 cm. Pas 1 bouteille t25 passe 2 boîtes de 10cm.

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