Trzol (réactif total d'extraction d'ARN)

Trzol (réactif total d'extraction d'ARN)

Introduction du produit:

Les réactifs trzol sont des agents qui extraient l'ARN total directement des cellules ou des tissus. Il maintient l'intégrité de l'ARN lors de la fragmentation et de la lyse des cellules. On centrifuge après addition de chloroforme et on sépare l'échantillon en une couche aqueuse et une couche organique. L'ARN est présent dans la couche aqueuse. Après collecte de la couche aqueuse ci - dessus, l'ARN peut être récupéré par précipitation dans l'isopropanol.

Qu'il s'agisse de tissus humains, animaux, végétaux ou bactériens, cette méthode permet une meilleure séparation des tissus et des cellules en petites et grandes quantités. La simplicité de fonctionnement du réactif trzol permet de traiter plusieurs échantillons simultanément. Toutes les opérations peuvent être effectuées en une heure. L'ARN total extrait par trzol permet d'éviter la contamination de l'ADN et des protéines. Il est donc possible de réaliser des analyses de transfert d'ARN, d'hybridation spot, de sélection Poly (A) +, de transcription in vitro, d'analyse de protection RNase et de clonage moléculaire.

Le réactif trzol favorise la libération de nombreux ARN de différentes tailles de poids moléculaire dans différents genres. Par exemple, l'ARN extrait du foie de rat est passé par électrophorèse sur gel d'agarose et coloré au bromure d'éthidium, et de nombreuses bandes discontinues de haut poids moléculaire (ARNm et composants de l'arnh) entre 7 KB et 15 KB sont visibles, deux Ribosomes dominants ~ 5 KB (28S) et ~ 2 KB (18s) et des ARN de bas poids moléculaire entre 0,1 et 0,3 KB (ARNt, 5S). Lorsque l'ARN extrait est dilué avec te, son rapport a 260 / a 280 est ≥ 1,8.

Stockage du produit: trzol est stable jusqu'à 12 mois à température ambiante. Néanmoins, pour de bons résultats, nous recommandons de le conserver entre 2 et 8 ° c. (les opérations spécifiques sont détaillées dans les instructions)

I. ADN modèle: la réaction PCR nécessite un ADN modèle, tel que l'extraction de l'ADN des cellules, des tissus, du sang, etc.;

II. Amorces: deux amorces de la réaction de PCR, appariées respectivement avec les deux extrémités de l'ADN modèle pour les régions spécifiques nécessaires à l'amplification, les amorces peuvent également être synthétisées en amorces utilisées dans des processus tels que le clonage ta;

Iii. Dntps: quatre dntps sont nécessaires dans la réaction de PCR, y compris le désoxyadénylate (datp), le désoxythymidate (dctp), le désoxyguanylate (dgtp), le désoxycytidinate (dttp), pour des processus biologiques tels que la Division cellulaire, la synthèse de l'ADN, l'extension et l'amplification des brins d'ADN modèle amplifiés par PCR;

Taq ADN polymérase: polymérase nécessaire pour la réaction PCR, généralement en utilisant Taq polymérase, il existe d'autres types de polymérases telles que Pfu, phusion, etc., pour l'amplification des brins d'ADN;

V. solution de buffer PCR: a un effet tampon sur la réaction PCR, ajuste le pH de la réaction, le thiosulfate SDS, de petites molécules de composés organiques tels que le formaldéhyde, peut améliorer la spécificité de la réaction PCR, améliorant ainsi l'efficacité de la réaction;

Système de coupure enzymatique: l'amplification par PCR implique souvent des étapes expérimentales telles que la recombinaison, la construction et le séquençage, nécessitant souvent des opérations de coupure enzymatique.

Mark: un standard de poids moléculaire pour distinguer la taille d'un fragment d'ADN.

Viii. Kit de purification de l'ADN: pour la purification des produits de réaction PCR;

Porridge nu; oligo DT
Lors de la sélection d'oligo DT, il est nécessaire que l'ARN ait Poly a, de sorte que les ARNm des eucaryotes conviennent. RT adapté pour les ARNm à longue chaîne ou même pleine longueur, avec des exigences de qualité élevées pour les échantillons d'ARN, sans contamination évidente de l'ADN, dégradation de l'ARN et rupture de l'ARN. Si vous souhaitez explorer de nouveaux ARNm pour les réactions de RT, l'amorce oligo dt est recommandée. L'utilisation d'amorces oligo dt est préférable à la stabilité des amorces aléatoires et spécifiques.
② amorces aléatoires
RT adapté à une variété d'ARN, en particulier dans les situations où l'abondance de la matrice est faible (par exemple, une certaine expression de gène est faible). Lors de la sélection d'amorces aléatoires, la synthèse de l'adnc en chaîne est basée sur tous les ARN, puis la réaction de PCR est conçue pour l'amplification spécifique des amorces. Notez également la relation entre la quantité d'amorces aléatoires et la quantité totale d'ARN, il est généralement recommandé d'utiliser 50 ng d'amorces aléatoires par 5 µg d'ARN total, et si la quantité d'amorces aléatoires par 5 µg d'ARN total est supérieure à 250 ng, cela peut entraîner une augmentation des produits en petits fragments (< 500 Pb) et une diminution des produits en longs fragments.
③ amorces spécifiques
Une amorce spécifique d'un gène (GSP) est une partie de la séquence d'un certain gène, une amorce complémentaire d'un modèle. Cette amorce doit être conçue en liaison avec une séquence connue de l'ARN cible. Comme les amorces et les séquences d'ARN se lient spécifiquement, chaque ARN cible nécessite un nouvel ensemble d'amorces spécifiques au gène. Par conséquent, lors de l'analyse de plusieurs cibles, plus d'échantillons d'ARN doivent être appliqués. Et la température de recuit des amorces différentes n'est pas la même, donc elle n'est généralement pas recommandée. Si l'utilisation d'amorces spécifiques est nécessaire, il est recommandé d'optimiser la température de recuit.