22rv1 (cellules cancéreuses de la prostate humaine)

22rv1 (cellules cancéreuses de la prostate humaine)

Autre nom 22RV1; 22Rv-1; 22rV1; CWR22-Rv1; CWR22R-V1; CWR22-R1; CWR22Rv1; Le CWR22R

Genre espèce Humain

Âge (sexe) homme, adultes

Sources organisationnelles La Prostate

Caractéristiques de croissance Cellules plaquées

Forme cellulaire Cellules épithéliales comme

Description du contexte 22rv1 est une lignée de cellules épithéliales de cancer de la prostate humaine issue d'une xénotransplantation (passages successifs chez des souris dont la castration a provoqué un déclin du cancer de la prostate puis une récidive suite à une greffe cwr22 androgène - dépendante de leur père); La lignée cellulaire 22rv1 exprime l'Antigène prostatique spécifique. La dihydroxytestostérone stimule légèrement la croissance des cellules 22rv1 et le produit de lyse est détecté par Western Blot pour répondre immunologiquement aux anticorps anti - récepteurs des hormones mâles; EGF stimule la croissance des cellules 22rv1, mais TGF bêta - 1 ne peut pas inhiber la croissance cellulaire; 22rv1 peut devenir tumoral chez les souris nues.

Niveau de biosécurité 2

Milieu de croissance RPMI-1640 + 10 % FBS + 1 % P/S

Proportion de générations recommandée 1: 3 - 1: 4

Fréquence de changement de liquide recommandée 2 ~ 3 fois / semaine

Temps de multiplication ~ 40 heures

Conditions de congélation

Liquide de stockage congelé:55% milieu de base + 40% FBS + 5% DMSO

Température: azote liquide

Conditions de culture

Phase gazeuse: air,95%； CO2, 5 %

Température:37℃

Tumorigène Oui, forme des tumeurs chez les souris nues.

Situation de l'expression des récepteurs récepteur androgène

Précautions Le DMSO doit être éliminé par centrifugation lorsque les cellules 22rv1 sont réanimées. La phase initiale de la réanimation des cellules cryoconservées, avec peu d'application, est appliquée en grappes, mais finalement les cellules s'aplatissent et se propagent en une bonne monocouche, ce processus prend 4 - 5 jours. La croissance cellulaire est lente et les cellules ne peuvent atteindre que 90% de confluence. Le taux de survie de la réanimation après lyophilisation cellulaire n'est pas élevé et le ratio de lyophilisation recommandé est de 90% sérum + 10% DMSO, en utilisant un sérum de qualité supérieure.

Précautions:

1, après avoir reçu les cellules, s'il vous plaît contactez - nous immédiatement si vous trouvez que la glace carbonique a été volatilisée propre, le bouchon du tube de congélation est tombé, cassé et les cellules sont contaminées.

2, les cellules reçues d'abord ne pas ouvrir le bouchon de la bouteille, le corps de la bouteille après essuyage de l'alcool est placé dans l'incubateur et laissé reposer pendant 2 - 4 heures (en fonction de la densité cellulaire) pour stabiliser l'état cellulaire. La croissance cellulaire est ensuite observée au microscope inversé et les cellules sont photographiées à différents multiples (il est recommandé de prendre une photo de l'aspect général lors de la collecte des cellules, d'observer la couleur du milieu et s'il y a des fuites, puis l'état des cellules au microscope, un pour 100 *, un pour 200 * chacun), d'observer si les cellules enregistrées sont contaminées pendant le transport. Comme base de nos ventes.

3, parce que l'état des cellules est influencé par de nombreux facteurs tels que l'environnement, le fonctionnement et le transport, notre société ne garantit que l'état des cellules dans la semaine suivant la réception des cellules par le client, de sorte que le client doit présenter la preuve du temps de réception des cellules et le client fournit le temps de réception et la preuve du temps de communication du personnel de service après la découverte du problème, l'intervalle de temps ne peut pas être supérieur à 7 jours.

Toutes les cellules animales sont considérées comme potentiellement dangereuses pour la biologie et doivent être manipulées dans un bureau de sécurité biologique de niveau 2, et veuillez prendre soin de la protection, tous les déchets liquides et les ustensiles qui ont été en contact avec ces cellules doivent être stérilisés et jetés.

Traitement cellulaire:

1) réanimation des cellules lyophilisées: les lyophilisateurs contenant 1 ml de suspension cellulaire sont décongelés en agitant rapidement dans un bain - Marie à 37 ° C, ajoutés à un tube à centrifuger contenant 4 - 6 ml de milieu de culture pour bien mélanger. Centrifuger à 1000 RPM pendant 3 - 5 min, éliminer le surnageant et remettre les cellules en suspension dans le milieu. La suspension cellulaire est ensuite ajoutée à des flacons (ou boîtes) contenant 6 - 8 ml de milieu pour incubation à 37°c pendant une nuit. La croissance cellulaire et la densité cellulaire sont observées au microscope le lendemain.

2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 70% - 90%, la culture de passage peut être effectuée. Cette cellule est une cellule suspendue et légèrement plaquée, le passage peut se référer aux méthodes suivantes:

1, Collection: les cellules en suspension dans le flacon de culture sont collectées dans un tube de centrifugation. Les cellules sont rincées 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium, magnésium. Étant donné que les cellules se détachent après le lavage du PBS, le PBS est également recyclé dans le tube de centrifugation.

Ajouter 0,25% (P / v) 0,53 mm EDTA dans un flacon de culture (flacon t25 1 - 2 ml, flacon T75 2 - 3 mL) dans un incubateur à 37 ° C pendant 1 - 2 minutes pour la digestion (les cellules difficiles à digérer peuvent prolonger le temps de digestion de manière appropriée), puis observer la digestion des cellules au microscope, si la plupart des cellules deviennent arrondies et tombent rapidement revenir à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après ajouter 3 - 4 ml de milieu contenant 10% de FBS pour terminer la digestion.

3, les cellules en suspension recueillies, les cellules dans le liquide de nettoyage PBS et les cellules épitaxiées digérées sont centrifugées à 1000 rpml pendant 5 min, défaussées pour le surnageant, la suspension cellulaire est divisée dans un nouveau flacon t25 dans un rapport de 1: 2 après reconstitution avec 1 - 2 ml de solution de culture, Ajouter 6 - 8 ml de nouveau milieu configuré selon les exigences des instructions pour maintenir la vitalité de croissance des cellules, les passages suivants sont effectués dans un rapport de 1: 2 ~ 1: 5 selon la situation réelle.

3) lyophilisation cellulaire: après réception des cellules, il est recommandé de lyophiliser un lot de semences cellulaires pour une utilisation expérimentale ultérieure au cours des 3 premières générations de culture. Exemple pour la bouteille t25 ci - dessous:

1, la congélation des cellules lors de la collecte de cellules bien digérées dans le tube de centrifugation selon le processus de passage des cellules, peut être compté à l'aide de la plaque de comptage des globules pour déterminer la densité de la congélation des cellules. La densité de lyophilisation recommandée pour les cellules générales est de 1 × 10⁶ ~ 1 × 10⁷ cellules vivantes / ML.

2, centrifuger 3 - 5min à 1000rpm, enlever le surnageant. Les cellules sont remises en suspension avec le lyophilisat cellulaire formulé, chaque ml de lyophilisat contenant 1 × 10⁶ ~ 1 × 10⁷ cellules vivantes / ML alloué dans un lyophilisateur distribuer les cellules dans un lyophilisateur, étiqueté avec le nom, l'algèbre, la date et d'autres informations.

3, placer les cellules à geler dans la boîte de refroidissement du programme, - 80 degrés réfrigérateur pendant la nuit, après quoi transférer dans un récipient d'azote liquide pour le stockage. La position du bon réservoir de congélation dans le réservoir d'azote liquide est enregistrée simultanément pour une consultation et une utilisation ultérieures.

Étapes opérationnelles:

Étape 1: sortir le liquide de congélation non programmé sans sérum du réfrigérateur, prêt à l'emploi

Etape 2: centrifugation pour collecter les cellules en phase de croissance logarithmique (digestion des cellules collées et centrifugation, centrifugation directe des cellules en suspension, vitesse de rotation 1200 RPM ou 250g, temps 3min)

Étape 3: abandonner le surnageant, ajouter la quantité appropriée de sérum non programmé lyophilisat, remettre les cellules en suspension

Étape 4: Suivez la quantité de 1 ~ 1,5 ml / tube dans le tube de congélation, serrez le couvercle du tube et faites un bon marquage

Étape 5: déplacer le lyophilisateur directement dans le réfrigérateur à - 80 ℃, après 24h transférer à l'azote liquide pour la conservation à long terme

Lorsqu'il n'y a pas de bac de congélation ou de liquide de congélation non programmé, vous pouvez choisir de refroidir manuellement le gradient. Mais le refroidissement Manuel du gradient ne s'applique pas à toutes les cellules et l'effet est instable, il est également nécessaire de faire un test de congélation en premier.

Produits vendus par la société:

Ccrf - CEM [ccrf - CEM] (lymphocytes T de leucémie lymphoblastique aiguë humaine)

A9 (cellules du tissu conjonctif sous - cutané de souris)

AAV - 293 (cellules rénales embryonnaires humaines)

ACC - 2 (cellules de cancer kystique adénoïde salivaire humain)

Achn (cellules d'adénocarcinome rénal humain)

AGS (cellules d'adénocarcinome gastrique humain)

Ana - 1 (macrophages de souris)

Anglne (cellules cancéreuses ovariennes humaines)

Ar42j (cellules exocrines pancréatiques de rat)

Arpe - 19 (cellules épithéliales rétiniennes humaines)

ASPC - 1 (cellules cancéreuses pancréatiques métastatiques humaines)

Att - 20 (cellules tumorales pituitaires de souris)

B16 (cellules de mélanome de souris)

Bcap - 37 (cellules du cancer du sein humain)

Bel - 7402 (cellules cancéreuses du foie humain)

Facteur de trilobe intestinal de porc(ITF) kits de détection ELISA

Poison lymphatique humainKit de détection su Beta (LTB)

Blanc de porcKit de détection su3 (il - 3)

Métalloprotéines matricielles de hamsterMei9 / gélatine meib (MMP - 9 / gelatinase b) Kit ELISA

Virus de l'oreille bleue du porcKit RT - PCR

Virus iridescent de l'esturgeon blancKit PCR

BowglobulovirusKit de détection PCR

Actinomycètes EndophyllumKit de détection PCR

Staphylocoque ArletteKit PCR

Histoplasma génériqueKit PCR

Plantes génétiquement modifiéesKit de test Pat Gene PCR

22rv1 (cellules cancéreuses de la prostate humaine)Staphylocoque ArletteKit PCR

1 (RT - 1 virus de l'herpès pyrène type 1 PCR kit

TrypanosomesKit PCR

Virus de la peste porcine africaineKit de détection PCR