Protéine recombinante du facteur de besoin humain à haute température A1 (HTRA1)

Facteur de demande à haute température humaineProtéine recombinante A1 (HTRA1)

Nom du produit: facteur de demande à haute températureProtéine recombinante A1 (HTRA1)

Nom anglais:Facteur d'exigence à haute température recombinant A1 (HTRA1)

HtrA; L56; ORF480; PRSS11; HtrA Sérine Peptidase 1; protéase, sérine, 11; IGFBP5-protéase; Exigence à haute température A sérine peptidase 1

Modèle:CS-D003

Enzymes et kinases

Espèces:Homo sapiens (humain, humain)

Source: expression procaryote

HôteE. coli

Niveau d'endotoxines:< 1,0 eu / μg (déterminé par Lal)

Localisation subcellulaire:: sécrétion, cytoplasme

Poids moléculaire prédit:47,2 kDa

Poids moléculaire réel:47 kDa (voir les instructions pour l'analyse différentielle)

Fragments et Tags:Gly204~Leu364 avec N-terminal His et GST Tag

Composition du tampon:Tris 20 mm, tampon NaCl 150 mm (pH 8,0, contient 1 mm EDTA, 1 mm DTT, 0,01% skl, 5% trehalose et proclin300)

Caractéristiques: poudre lyophilisée

Pureté:> 90%

Point isoélectrique:6.6

Application:Contrôle positif ; immunogène; SDS-PAGE ; WB.

Spécifications:10μg50μg200μg1mg5mg

1, extraction de protéines tissulaires

1) Équipement requis: machine à glace, stylo marqueur, deux ensembles de tubes EP de 1,5 ml (traitement haute température et haute pression), une grande boîte à glace, une boîte de tube EP de 1,5 ML, gants, ciseaux ophtalmiques (traitement haute température et haute pression), tissus frais ou conservés dans un réfrigérateur à - 80 ° C, PBS (traitement haute température et haute pression) conservé dans un réfrigérateur à 4 ° C, pistolet à pipette, tête d'aspiration (traitement haute température et haute pression), deux ensembles de barres ABRASIVES (traitement haute température et haute pression), centrifugeuse palmaire, papier filtre, lysat tridécontaminé, fluorure de phénylméthylsulfonate (PMSF, un inhibiteur de protéase, hautement toxique), centrifugeuse, bécher, Coagulant 2xsds tampon sur gomme, Dithiothréitol (DTT), oscillateur, plaque de mousse.

A. mécanisme de fabrication de glace glace;

B. Le stylo marqueur marque les deux ensembles de tubes EP;

C. placez la grande boîte à glace, la boîte de tube EP sur la glace, un ensemble de stylos marqueurs bien étiquetés tubes EP placés dans la grande boîte à glace, un autre ensemble de stylos marqueurs bien étiquetés tubes EP placés dans la boîte de tube EP, portez de bons gants, apportez la boîte de tube EP, ciseaux ophtalmiques couper la taille des haricots jaunes (environ 100 mg) tissus frais ou conservez - les dans - 80 ℃ tissu réfrigérateur;

D. retirer le PBS conservé au réfrigérateur à 4 ℃, ajouter goutte à goutte 1 ml de PBS dans le tube EP, cisaillement ophtalmique du tissu déchiqueté (action rapide), centrifuger à la paume, éliminer le surnageant, ajouter goutte à goutte 1 ml de PBS dans le tube EP, broyer la tige de broyage, centrifuger à 3000 tours pendant 10 minutes, éliminer le surnageant, papier filtre aspirer le liquide résiduel dans l'embouchure autant que possible, estimer le volume de précipité dans le tube EP, les étapes ci - dessus fonctionnent sur la glace autant que possible;

E. retirer le lysat de décontamination triple du réfrigérateur 4 ℃, - 20 ℃ réfrigérateur retirer PMSF dans une grande boîte à glace, ajouter goutte à goutte le précipité 3 - 5 fois le volume de lysat de décontamination triple dans le tube EP (généralement 5 fois), puis ajouter PMSF (les deux dans un rapport de 94: 6), broyage de la barre de broyage (craquage complet sur la glace pendant 20 - 30 minutes), les étapes ci - dessus doivent être effectuées;

F. la centrifugeuse est pré - refroidie, le liquide de tissu après craquage suffisant est centrifugé à 4 ° C, 10 000 tours pendant 10 minutes;

G. Lavez le bécher avec de l'eau du robinet, versez de l'eau à vapeur unique et faites bouillir sur la cuisinière électrique;

H. préparer 2 x SDS gel tampon d'addition (stocké à la température normale), retirer le DTT conservé au réfrigérateur à - 20 ℃, placer dans une grande boîte à glace, aspirer quantitativement le surnageant après centrifugation avec un pistolet à pipette dans un autre ensemble de tubes EP (ne pas aspirer le précipité sous - jacent), appuyez sur surnageant: 2 x SDS: DTT = 1: 0,8: 0,2 ajouter 2 x SDS et DTT, centrifuger sur la paume, puis insérer soigneusement le tube EP dans la plaque de mousse, mettre dans un bécher bouilli et cuire pendant 6 - 8 minutes (la puissance du four électrique ne doit pas être trop ajustée Pour que le couvercle du tube ne s'ouvre pas);

I. Retirez la plaque de mousse avec une pince à épiler, laissez refroidir dans une grande boîte à glace pendant 10 minutes, centrifugez la paume, puis mettez - la dans le réfrigérateur à - 20 ℃ pour la sauvegarde.

Remarque: le lysat peut également être choisi comme lysat de décontamination unique ou lysat cellulaire, etc.

2, extraction de protéine cellulaire murale (la teneur en protéines cellulaires est généralement d'environ 1x10 - 9mg / cellule)

1) matériel nécessaire: machine à glaçons, raclette cellulaire, stylo marqueur, deux ensembles de tubes EP de 1,5 ml (traitement haute température et haute pression), deux grandes boîtes à glace, des gants, des flacons de culture remplis de cellules, PBS conservé au réfrigérateur à 4 ° C, lysat de tri - décontamination, Fluorure de phénylméthylsulfonate (PMSF, un inhibiteur de protéase, très toxique), pistolet à pipette, tête d'aspiration (traitement haute température et haute pression), papier filtre, centrifugeuse, bécher, tampon sur gel SDS 4x, Dithiothréitol (DTT), plaque de mousse.