293 Hek - 293 (cellules rénales embryonnaires humaines)

293 Hek - 293 (cellules rénales embryonnaires humaines)

Autre nomHeck 293; Hek - 293; Salut 293; H: 293; 293; 293 hectares; Rein embryonnaire humain 293

Protocole de culture a (par défaut)

Milieu de croissance:

MEM (ATCC amélioré) + 10% FBS + 1% P / s

Conditions de culture:

Phase gazeuse: air, 95%; CO2， 5%, température: 37℃

PrécautionsCette cellule applique des murs lâches, Veuillez essayer d'être aussi doux que possible lors de l'opération; Le milieu de culture doit être préchauffé lors du changement de liquide; Réception des marchandises s'il y a de grandes masses de cellules qui tombent, pour un phénomène normal, veuillez suivre les précautions de réception.

Références (sources)

Description de fond cellules immortalisées formées de cellules rénales embryonnaires humaines transfectées par adénovirus humain cisaillé 5 (ad5), contenant et exprimant le gène ad5 transfecté. Les premiers rapports indiquaient que le génome contenait l'ADN des extrémités gauche et droite du génome de l'adénovirus 5 (ad5), mais il est maintenant clair que seul l'ADN de son extrémité gauche est présent. Le séquençage Clonal du point d'insertion de l'ad5 a révélé que le nucléotide linéaire en position 1 - 4344 de l'ad5 était intégré dans le Chromosome 19 (19q13.2). Un hôte amplifié pour un vecteur adénoviral humain, un récepteur de surface cellulaire qui peut exprimer la bosonine anormale, composé de la Sous - unité bêta 1 de l'intégrine et de la Sous - unité alpha - V du récepteur de la bosonine.

Âge (sexe)Foetus

Sources organisationnellesLes reins; Transformation avec adénovirus 5dna

Types de cellulesLignées cellulaires transformées

Niveau de biosécuritéBSL-2

Temps de multiplication~ 24-30 heures

TumorigèneOui, forme des tumeurs chez les souris nues.

Situation de l'expression des récepteursvitronectine

Institution de dépôtATCC; CRL-1573 ATCC : PTA-4488 DSMZ : ACC-305 ECACC : 85120602

Traitement cellulaire:

1) réanimation des cellules lyophilisées: les lyophilisateurs contenant 1 ml de suspension cellulaire sont décongelés en agitant rapidement dans un bain - Marie à 37 ° C, ajoutés à un tube à centrifuger contenant 4 - 6 ml de milieu de culture pour bien mélanger. Centrifuger à 1000 RPM pendant 3 - 5 min, éliminer le surnageant et remettre les cellules en suspension dans le milieu. La suspension cellulaire est ensuite ajoutée à des flacons (ou boîtes) contenant 6 - 8 ml de milieu pour incubation à 37°c pendant une nuit. La croissance cellulaire et la densité cellulaire sont observées au microscope le lendemain.

2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 70% - 90%, la culture de passage peut être effectuée. Cette cellule est une cellule suspendue et légèrement plaquée, le passage peut se référer aux méthodes suivantes:

1, Collection: les cellules en suspension dans le flacon de culture sont collectées dans un tube de centrifugation. Les cellules sont rincées 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium, magnésium. Étant donné que les cellules se détachent après le lavage du PBS, le PBS est également recyclé dans le tube de centrifugation.

Ajouter 0,25% (P / v) 0,53 mm EDTA dans un flacon de culture (flacon t25 1 - 2 ml, flacon T75 2 - 3 mL) dans un incubateur à 37 ° C pendant 1 - 2 minutes pour la digestion (les cellules difficiles à digérer peuvent prolonger le temps de digestion de manière appropriée), puis observer la digestion des cellules au microscope, si la plupart des cellules deviennent arrondies et tombent rapidement revenir à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après ajouter 3 - 4 ml de milieu contenant 10% de FBS pour terminer la digestion.

3, les cellules en suspension recueillies, les cellules dans le liquide de nettoyage PBS et les cellules épitaxiées digérées sont centrifugées à 1000 rpml pendant 5 min, défaussées pour le surnageant, la suspension cellulaire est divisée dans un nouveau flacon t25 dans un rapport de 1: 2 après reconstitution avec 1 - 2 ml de solution de culture, Ajouter 6 - 8 ml de nouveau milieu configuré selon les exigences des instructions pour maintenir la vitalité de croissance des cellules, les passages suivants sont effectués dans un rapport de 1: 2 ~ 1: 5 selon la situation réelle.

3) lyophilisation cellulaire: après réception des cellules, il est recommandé de lyophiliser un lot de semences cellulaires pour une utilisation expérimentale ultérieure au cours des 3 premières générations de culture. Exemple pour la bouteille t25 ci - dessous:

1, la congélation des cellules lors de la collecte de cellules bien digérées dans le tube de centrifugation selon le processus de passage des cellules, peut être compté à l'aide de la plaque de comptage des globules pour déterminer la densité de la congélation des cellules. La densité de lyophilisation recommandée pour les cellules générales est de 1 × 10⁶ ~ 1 × 10⁷ cellules vivantes / ML.

2, centrifuger 3 - 5min à 1000rpm, enlever le surnageant. Les cellules sont remises en suspension avec le lyophilisat cellulaire formulé, chaque ml de lyophilisat contenant 1 × 10⁶ ~ 1 × 10⁷ cellules vivantes / ML alloué dans un lyophilisateur distribuer les cellules dans un lyophilisateur, étiqueté avec le nom, l'algèbre, la date et d'autres informations.

3, placer les cellules à geler dans la boîte de refroidissement du programme, - 80 degrés réfrigérateur pendant la nuit, après quoi transférer dans un récipient d'azote liquide pour le stockage. La position du bon réservoir de congélation dans le réservoir d'azote liquide est enregistrée simultanément pour une consultation et une utilisation ultérieures.

Étapes opérationnelles:

Étape 1: sortir le liquide de congélation non programmé sans sérum du réfrigérateur, prêt à l'emploi

Etape 2: centrifugation pour collecter les cellules en phase de croissance logarithmique (digestion des cellules collées et centrifugation, centrifugation directe des cellules en suspension, vitesse de rotation 1200 RPM ou 250g, temps 3min)

Étape 3: abandonner le surnageant, ajouter la quantité appropriée de sérum non programmé lyophilisat, remettre les cellules en suspension

Étape 4: Suivez la quantité de 1 ~ 1,5 ml / tube dans le tube de congélation, serrez le couvercle du tube et faites un bon marquage

Étape 5: déplacer le lyophilisateur directement dans le réfrigérateur à - 80 ℃, après 24h transférer à l'azote liquide pour la conservation à long terme

Lorsqu'il n'y a pas de bac de congélation ou de liquide de congélation non programmé, vous pouvez choisir de refroidir manuellement le gradient. Mais le refroidissement Manuel du gradient ne s'applique pas à toutes les cellules et l'effet est instable, il est également nécessaire de faire un test de congélation en premier.

Précautions:

1, après avoir reçu les cellules, s'il vous plaît contactez - nous immédiatement si vous trouvez que la glace carbonique a été volatilisée propre, le bouchon du tube de congélation est tombé, cassé et les cellules sont contaminées.

2, les cellules reçues d'abord ne pas ouvrir le bouchon de la bouteille, le corps de la bouteille après essuyage de l'alcool est placé dans l'incubateur et laissé reposer pendant 2 - 4 heures (en fonction de la densité cellulaire) pour stabiliser l'état cellulaire. La croissance cellulaire est ensuite observée au microscope inversé et les cellules sont photographiées à différents multiples (il est recommandé de prendre une photo de l'aspect général lors de la collecte des cellules, d'observer la couleur du milieu et s'il y a des fuites, puis l'état des cellules au microscope, un pour 100 *, un pour 200 * chacun), d'observer si les cellules enregistrées sont contaminées pendant le transport. Comme base de nos ventes.

3, parce que l'état des cellules est influencé par de nombreux facteurs tels que l'environnement, le fonctionnement et le transport, notre société ne garantit que l'état des cellules dans la semaine suivant la réception des cellules par le client, de sorte que le client doit présenter la preuve du temps de réception des cellules et le client fournit le temps de réception et la preuve du temps de communication du personnel de service après la découverte du problème, l'intervalle de temps ne peut pas être supérieur à 7 jours.

Toutes les cellules animales sont considérées comme potentiellement dangereuses pour la biologie et doivent être manipulées dans un bureau de sécurité biologique de niveau 2, et veuillez prendre soin de la protection, tous les déchets liquides et les ustensiles qui ont été en contact avec ces cellules doivent être stérilisés et jetés.
Produits vendus par la société:

Fibroblastes musculaires squelettiques de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules précurseurs neurooligodendrogliales de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules précurseurs neurooligodendroïdes de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules souches hématopoïétiques de moelle osseuse de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules du cartilage trachéal de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Fibroblastes gingivaux de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Lymphocytes sanguins périphériques de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules musculaires lisses mésentériques de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules musculaires lisses vasculaires carotidiennes de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules de mamelon de vraie fourrure de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules souches mésenchymateuses de bourgeons de membres embryonnaires de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules de Purkinje de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules souches nerveuses de la moelle épinière de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules souches embryonnaires de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules de neurones trijumeaux de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules périvasculaires microvasculaires rétiniennes de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules souches endodontiques de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules nucléaires uniques de moelle osseuse de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Fibroblastes de film blanc de pénis de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules de neurones trijumeaux de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules bulbeuses olfactives de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Fibroblastes de la paroi vaginale de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Chondrocytes cotylocytaires de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

293 Hek - 293 (cellules rénales embryonnaires humaines) Cellules musculaires intestinales de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules de Purkinje de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Fibroblastes scléraux de sourisFlacon de culture cells / t25 5×10⁵

Cellules souches embryonnaires de ratFlacon de culture cells / t25 5×10⁵