Les cellules Akr

Nom du produit :Les cellules Akr

Les cellules AkrVers le post - traitement

Le remplissage du liquide de culture et la fermeture de l'embouchure de la bouteille après que les cellules aient été cultivées en bon état dans un flacon de culture est la méthode de transport cellulaire. Après avoir reçu les cellules de retour à leur propre laboratoire, ouvrez d'abord l'emballage extérieur, utilisez75% d'alcool pulvérisé toute la bouteille après désinfection à l'intérieur de la table ultra - propre, opération strictement stérile，Incubateur reposer2 - 4 heures. observation sous miroir: pas dépasséÀ 80% de confluence, le liquide de culture peut être mis en bouteilleCollecte au tube de centrifugationDans, rejoindre6 ml de milieu, mettre37℃, incubation en incubateur à 5% de CO2; Au - delà de 80% de confluence, en fonction du passage ou de la congélation, voir les étapes de culture cellulaire pour les opérations spécifiques.（Notez que l'expédition est scellée bouteille de culture, mettre dans l'incubateur pour cultiver Rappelez - vous que le couvercle de la bouteille de culture est dévissé, après le passage recommande une bouteille avec le milieu de culture dans la bouteille d'origine, une autre bouteille avec son propre milieu de culture) et

Cellules cancéreuses oesophagiennes de souris AkrÉtapes de culture

Un,Cellules de réanimation: contiendraUn lyophilisateur de 1 ml de suspension cellulaire est décongelé rapidement sous agitation dans un bain - Marie à 37°c, 5 ml de milieu de culture sont ajoutés pour bien mélanger. Centrifuger à 1000 RPM pendant 5 minutes, éliminer le surnageant, compléter4 - 6mLBien souffler après le milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite ajoutées à la culture dans le flacon de culture pendant la nuit (ou la suspension cellulaire est ajoutée)Dans un plat de 6cm) etCultiver pendant la nuit. Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.

Deux,Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint80% - 90%, c'est - à - dire la culture de passage.

a), pour les cellules adhérentes, le passage peut se référer aux méthodes suivantes:

1. Jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

2. Plus1 -2 ml de digestif (0.25% Trypsin - 0,53 mm EDTA) dans des flacons de culture placés à 37°c pour la digestion dans un incubateur1-2min, puis observer la digestion des cellules au microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, tapoter quelques bouteilles de culture après l'ajoutPlus de 5mlContient10% de sérumLe milieu de culture termine la digestion.

3. Soufflez doucement les cellules, aspirez après la chute, centrifugez à 1000 RPM pendant 8 - 10 minutes, retirez le surnageant, ajoutez 1 - 2 ml de solution de culture et soufflez bien.

4. Appuyez sur5 - 6Ml / flacon de solution de culture supplémentaire, distribuer la suspension cellulaire dans un rapport de 1: 2 à un nouveau contenant5 - 6Ml de solution de culture dans une boîte neuve ou dans un flacon.

b),pourSuspensionCellules, passage peut se référer aux méthodes suivantes:

Méthode 1: collecter les cellules,Centrifuger pendant 8 - 10 minutes à 1000 RPM, défausser le surnageant, souffler après supplémentation avec 1 - 2 ml de solution de culture et distribuer la suspension cellulaire dans de nouvelles boîtes ou flacons contenant 8 ml de milieu dans un rapport de 1: 2 à 1: 5.

Méthode deux: Vous pouvez choisir la moitié de la méthode de changement de liquide, après avoir abandonné la moitié du milieu, suspendez les cellules restantes, appuyez sur la suspension cellulaireLes proportions de 1: 2 à 1: 3 sont réparties dans de nouvelles boîtes contenant 8 ml de milieu ou dans des flacons.

PS :Si le client reçoit2ml de cellules tubulaires, après avoir reçu les cellules, pulvériser l'ensemble du tube avec de l'alcool à 75% après la désinfection dans une table ultra - propre ou une armoire de sécurité, opération strictement stérile; Transfert des cellules tubulaires dans un flacon de culture t25 ou6Boîte de pétri cm, ajouter5Ml de milieu gauche et droite mélanger, mettre dans l'incubateur pendant la nuit après la culture voir la densité cellulaire: si la densité n'est pas dépassée80%, l'échange de liquide continue la culture, soit par passage, soit par congélation, selon le cas. Si la densité dépasse80%, la transmission peut être effectuée directement (méthode ibid.).

Trois,Stockage des cellules congelées:（Remarque: méthode de lyophilisation des cellules sans sérum, veuillez vous référer à notre numéro d'expédition:le C7001) et

1、Croissance cellulaire jusqu'à couvrir le flacon de cultureÀ 80% de la surface, jeter le liquide de culture dans un flacon de culture de 25 cm 2 et laver les cellules une fois avec du PBS;

2、ajouterLe suc digestif est d'environ 1 mL dans un flacon de culture, observé au microscope inversé, la digestion est terminée par l'ajout du suc de culture après la rétraction des cellules à arrondir, les cellules sont doucement soufflées pour les faire tomber, puis la suspension est transférée dans un tube à centrifuger de 15 ml et centrifugée à 1000 tr / min pendant 5 min;

3、Remettre les cellules en suspension avec une quantité appropriée de lyophilisat et les placer dans un lyophilisateur;

4、Placer d'abord le lyophilisateur cellulaire sur- 20 ℃ 1,5 H, puis le déplacer à - 80 ℃