Cellules épithéliales de l'endomètre humain

L'épithélium endométrial humain est séparé du tissu utérin; L'utérus est l'organe qui donne naissance au fœtus, situé au milieu de la cavité pelvienne, entre la vessie et le rectum, et sa position peut varier en fonction du degré de remplissage de la vessie et du rectum ou de la position du corps. La position normale de l'utérus repose principalement sur des structures telles que les ligaments utérins, le diaphragme pelvien, le diaphragme génito - urinaire et le tendon central périnéal, qui, lorsqu'ils sont endommagés ou flasques, peuvent provoquer un prolapsus utérin. L'endomètre, la muqueuse, se compose d'un épithélium (un genre d'épithélium colonnaire monocouche avec des cellules sécrétrices et ciliées) et d'une membrane intrinsèque (constituée de tissu conjonctif à l'intérieur duquel se trouvent un grand nombre de cellules en forme d'étoile, appelées cellules stromales), l'endomètre peut être divisé en une membrane fonctionnelle superficielle et une sous - couche basale profonde, la couche fonctionnelle étant plus épaisse et occupant environ l'épaisseur de la membrane interne.4 / 5; La couche de base est mince et dense, de l'ordre de 1 / 5, la couche fonctionnelle est pelable alors que la couche de base ne l'est pas. Fonction principale des cellules épithéliales de l'endomètre: ① l'endomètre, également appelé muqueuse utérine, se réfère à une couche qui constitue la paroi interne de l'utérus de lactation; ② L'endomètre réagit à la fois à l'Kinésine et à la progestérone et peut donc changer considérablement avec le cycle sexuel (cycle œstral, cycle menstruel). L'endomètre est étroitement lié à l'implantation d'embryons et occupe une place importante dans l'étude de la physiologie de la reproduction. Les cellules épithéliales de l'endomètre jouent un rôle extrêmement important dans le processus de « dialogue» de l'embryon avec la mère. L'endomètre, qui constitue la couche la plus interne de la paroi utérine chez les mammifères femelles, est situé à la surface de la cavité utérine et occupe une place importante dans l'activité physiologique reproductive des animaux. L'utérus et l'endomètre sont des organes essentiels au maintien des fonctions physiologiques et de la fertilité chez les animaux femelles, et la réparation régénérative de l'endomètre est une fonction physiologique importante de l'utérus. Les cellules épithéliales de l'endomètre cultivées in vitro ont des implications importantes pour l'étude de leurs fonctions physiologiques, de l'action des médicaments et des modifications physiopathologiques sous l'action de divers facteurs pathogènes.
Introduction à la méthode:

L'épithélium endométrial humain isolé en laboratoire de la société est préparé par digestion à la collagénase, en combinaison avec le criblage de culture de milieu spécial pour les cellules épithéliales, le total des cellules est d'environ5×10? Cellules / bouteilles.
Détection de qualité:

Entreprise laboratoire Épithérèse endométriale humaine isoléeLa cytokeratine - 19 est identifiée par immunofluorescence, peut atteindre une pureté supérieure à 90% et ne contient pas de VIH - 1, de VHB, de VHC, de mycoplasmes, de bactéries, de levures et de champignons, etc.

Tous les produits de notre société sont destinés à des expériences scientifiques uniquement, ne font pas d'autres expériences scientifiques en dehors de leur utilisation!

Le paquet est conditionné Collagène de queue de ratI (2 à 5 μg/cm2)

Milieu de culture ContientFBS、 Additifs de croissance, Penicillin, streptomycine, etc.

Fréquence de changement de liquide chaque2 - 3 jours pour changer de liquide une fois

Caractéristiques de croissance Appliquer le mur

Forme cellulaire Cellules épithéliales comme

Caractéristiques des générations Transmissible2 - 3 générations

Liquide digestif 0,25% protéase Yi

Conditions de culture Phase gazeuse: air,95%； CO2, 5 %

préparation

1. Préparation de l'équipement expérimental: préparer des boîtes de pétri stériles, des flacons de culture, des pipettes, des tubes de centrifugation, des instruments chirurgicaux, etc., et procéder à l'autoclave ou à d'autres traitements de désinfection appropriés.

2. Préparation des réactifs: formulez ou achetez le milieu de culture approprié, les enzymes digestives (par exemple, collagénase, etc.), le sérum de veau foetal, le double anti - réactif et d'autres réactifs, assurez - vous qu'ils sont stériles et dans la période de validité.

3. Préparation des animaux de laboratoire ou des tissus d'origine: selon les besoins de l'expérience, les tissus nécessaires sont obtenus en sélectionnant les animaux appropriés et en effectuant l'anesthésie ou la mise à mort correspondante; Ou obtenez une organisation à partir d'une bibliothèque d'échantillons d'organisation existante.

Matériaux et traitement

1. Extrait: dans des conditions stériles, retirer rapidement le tissu cible, minimiser les dommages aux tissus et éliminer l'excès de graisse, le tissu conjonctif et d'autres tissus non destinés.

2. Lavage: rincez le tissu retiré plusieurs fois avec du PBS stérile prérefroidi pour éliminer le sang et les impuretés.

3. Couper: couper le tissu en petits morceaux d'environ 1 - 2 mm³ pour une digestion ultérieure.

Séparation cellulaire

1. Digestion: Placez les morceaux de tissu cisaillés dans un tube à centrifuger contenant la bonne quantité d'enzymes digestives et digérez dans un shaker ou un incubateur thermostaté à 37 ° C pendant un certain temps. Le tube de centrifugation peut être légèrement secoué pendant la période pour une digestion plus uniforme.

Arrêt de la digestion: lorsque la majeure partie du tissu est digérée en suspension unicellulaire ou en petites masses cellulaires, l'ajout d'un milieu contenant du sérum met fin à la digestion.

3. Filtration et centrifugation: la suspension cellulaire est filtrée avec un tamis cellulaire pour éliminer les débris de tissus non digérés, puis le filtrat est centrifugé à la vitesse de rotation appropriée pour recueillir les précipités cellulaires.

Observation et détection des cellules

1. Observation quotidienne: Observez la morphologie des cellules, l'état de croissance, la densité, etc. avec un microscope inversé tous les jours, enregistrez les changements cellulaires, tels que la découverte de la contamination cellulaire ou des anomalies, prenez les mesures appropriées en temps opportun.
2. Nombre de cellules et test de vitalité: lorsque nécessaire, les cellules peuvent être comptées et testées par des méthodes telles que la coloration au bleu Trypan pour comprendre la croissance et l'état de santé des cellules.

I. extraction et séparation

1. Opération rapide

- les tissus doivent être traités immédiatement après l'extraction, en évitant une exposition prolongée à la température ambiante ou à un environnement non nutritif.

- rincer les tissus avec du PBS stérile ou du sérum physiologique pour éliminer le sang, les impuretés.

2. Sélection des enzymes digestives

- sélectionnez les enzymes digestives en fonction du type de tissu et évitez les dommages cellulaires causés par une digestion excessive.

- le temps de digestion doit être strictement contrôlé (généralement 10 - 30 minutes) et l'état de dissociation cellulaire peut être observé au microscope.

II. Optimisation des conditions de culture

1. Sélection du milieu de culture

- l'utilisation de milieux contenant du sérum ou des facteurs de croissance spécifiques (par exemple dmem, rpmi 1640, etc.) nécessite l'ajout d'insuline, d'EGF, etc. à certaines cellules.

- Évitez les changements fréquents de marques ou de lots de milieu de culture et réduisez la pression d'adaptation cellulaire.

2. Mur et génération

- les cellules primaires ont une faible capacité d'application des parois et peuvent nécessiter une boîte de pétri (p. ex. collagène, polylysine).

- la densité au passage est recommandée pour être contrôlée à 70% - 80%, une confluence excessive peut entraîner une inhibition du contact et une différenciation.

Iii. Contrôle de la pollution

1. Opération stérile

- opération tout au long de la table ultra - propre, en utilisant des consommables jetables pour éviter la contamination croisée.

- un double anti peut être ajouté au milieu de culture, mais une utilisation prolongée peut affecter l'activité cellulaire.

2. Détection de mycoplasmes

- détection régulière de la contamination par Mycoplasma (par exemple par PCR), les cellules doivent être éliminées à temps après la contamination.

Iv. Surveillance de l'état

1. Observations quotidiennes

- vérifier la morphologie cellulaire, la densité et la couleur du milieu tous les jours et changer le milieu à temps (généralement tous les 2 - 3 jours).

- une morphologie anormale (par exemple, des cellules arrondies, une fragmentation accrue) peut suggérer une contamination ou des carences nutritionnelles.

2. Transmission et stockage par congélation

- le nombre de divisions cellulaires primaires est limité (généralement 5 - 10 générations) et les cellules secondaires précoces doivent être congelées à temps.

- le lyophilisat est recommandé avec du sérum DMSO + (ou un milieu de lyophilisation spécialisé) et l'azote liquide est conservé après refroidissement du gradient.