Souris hepatitis virus Probe Method Fluorescence Quantitative RT - PCR kit souches cellulaires classe

[nom du produit]Quantification par fluorescence de la méthode de la sonde du virus de l'hépatite chez la souris Kit RT - PCR

NomPour:Virus de l'hépatite de sourisProbegRT-PCRKit

[spécifications d'emballage]50 fois / boîte

【Utilisation prévue]Virus de l'hépatite chez la souris(mousehepatitisvirus, MHV) est un virus à ARN, le virus est présent dans le sang et les organes internes, en particulier le foie et les reins, également trouvé dans la septicémie, est très contagieux pour les jeunes souris, l'hépatite de la souris est une maladie infectieuse causée par le MHV 1, les souris avec le virus sont distribués dans, mais dans des circonstances normales sont généralement peu infectées, ne peut devenir une maladie mortelle que lorsqu'il est stimulé par des facteurs de stress, principalement l'hépatite et l'encéphalite, de sorte que l'identification rapide et précise du virus de l'hépatite de la souris joue un rôle important dans la prévention et la quarantaine de la maladie. Ce produit est un kit spécialement conçu pour détecter le virus de l'hépatite chez la souris, développé sur la base de la technologie RT - PCR quantitative par fluorescence par sonde, qui présente les caractéristiques suivantes:

1. Prêt à l'emploi, l'utilisateur doit seulement fournir le modèle d'ARN échantillon.

2. Les amorces et les sondes sont optimisées et ont une sensibilité élevée.

3. Fournir un contrôle positif pour faciliter la distinction entre les échantillons faux négatifs.

4. Haute spécificité, l'amorce est conçue selon la région hautement conservée du virus de l'hépatite de la souris et ne réagit pas avec l'ARN d'autres virus.

5. Ce produit est suffisant pour 50 réactions RT - PCR quantitatives de fluorescence par sonde du système de 20 μl.

6. Ce produit ne peut être utilisé que pour la recherche scientifique.

[spécifications et ingrédients]

【Transport et conservation].Transport à basse température,- 20 ° C de conservation, la durée de conservation est de 12 mois.

【Réactifs autonomes].échantillon RNA.

Kit RT - PCR quantitatif Fluorescent de la méthode de sonde de virus d'hépatite de souris[méthode d'utilisation]I. échantillon de courbe standard dilué (prenez 10e2 - 10e6 copies / μl, par exemple, ces 6 dilutions 10x) en raison de la très forte concentration de la norme, les dilutions suivantes doivent être effectuées dans des zones séparées et ne doivent pas contaminer l'échantillon ou d'autres composants de ce kit. Pour augmenter la stabilité du produit et éviter la propagation d'agents infectieux, ce produit ne fournit pas d'échantillons vivants pour un contrôle positif, mais uniquement des fragments d'ADN non infectieux pour un contrôle positif.

1. Marquer 6 tubes centrifuges, 6, 5, 4, 3, 2, 1.

2. Ajouter 45 μl de dilution de pochoir spéciale PCR fluorescente séparément avec la tête de pistolet à noyau (de préférence avec la tête de pistolet à noyau, la même chose).

Ajouter 5 μl1 × 10e7 copies / μl de contrôle positif (kit fourni) dans le tube 6, bien commotionner pendant 1 minute pour obtenir un échantillon de courbe standard de 1 × 10e7 copies / μl. Mettez de la glace à utiliser.

Changez la tête du pistolet, ajouter 5 μl1 × 10e6 copies / μl de contrôle positif (résultant de la dilution de l'étape supérieure) dans le tube n ° 5, bien commotionner pendant 1 minute pour obtenir un échantillon de courbe standard de 1 × 10e6 copies / μl. Mettez de la glace à utiliser.

Changer la tête du pistolet, ajouter 5 μl1 × 10e5 copies / μl de contrôle positif (résultant de la dilution de l'étape supérieure) dans le tube n ° 4, bien commotionner pendant 1 minute pour obtenir 1 × 10e4 copies / μl de l'échantillon de courbe standard. Mettez de la glace à utiliser.

6. Répétez les opérations ci - dessus jusqu'à ce que vous obteniez 6 échantillons de courbe standard dilués. Utilisez sur la glace.

II. Échantillons ARNLa préparation

7. S'il y a n échantillons, il est préférable de définir n + 2 extractions, un de plus étant PC (contrôle positif de la préparation de l'échantillon) et un NC (contrôle négatif de la préparation de l'échantillon). Il est possible d'utiliser 10 µl d'une dilution de 10 000 fois le témoin positif, plus une certaine quantité d'eau pour obtenir un volume total identique au volume demandé pour chaque préparation, comme PC. Utilisez également de l'eau comme NC.

8. Purification de l'ARN de l'échantillon par la méthode auto - sélectionnée, ce kit est compatible avec la plupart des kits d'extraction d'ARN viral disponibles sur le marché- Oui.

troisRéaction probeqrt - PCR(Système de 20 μl, effectué dans la Chambre de préparation des échantillons) et

9. Si l'analyse quantitative est effectuée et qu'une seule répétition est effectuée, N + 9 tubes PCR sont marqués, dont n + 2 pour les n + 2 échantillons obtenus à l'étape précédente, 1 pour les contrôles PCR négatifs (gabarit avec de l'eau) et 6 pour la courbe standard. Si l'analyse qualitative est effectuée et qu'une seule répétition est effectuée, N + 4 tubes PCR sont marqués, dont n + 2 pour les n + 2 échantillons obtenus à l'étape précédente, 1 pour les contrôles PCR négatifs (avec de l'eau comme gabarit) et 1 pour les contrôles PCR positifs (avec une dilution de contrôle positif dans le tube n ° 4 comme plaque de moulage). Les étapes opératoires ne sont décrites ci - après qu'en tant qu'analyse quantitative,

10. Ajouter les ingrédients en appuyant sur le tableau dans le tube marqueur (ce tableau ne répertorie qu'une seule répétition. Le tube échantillon et le témoin négatif sont configurés avant que le témoin positif ne soit configuré et que l'échantillon témoin positif attende que tous les tubes soient stockés avec le couvercle sur le couvercle)

11.Monter après avoir couvert le couvercle, procéder selon les paramètres ci - dessousqRT-PCR :

IV: traitement des données

12. Si ce kit est utilisé pour le test quantitatif, la courbe standard est tracée avec la valeur log de la concentration de contrôle positive comme axe horizontal et la valeur CT comme axe longitudinal. La valeur ct de l'échantillon à mesurer est extrapolée à partir de la courbe standard pour la valeur log de la concentration d'ARN de l'échantillon, puis sa concentration.

13. Si ce kit est utilisé pour un test qualitatif, seul le positif ou le négatif est jugé, le contrôle négatif CT doit être supérieur ou égal à 40. Les contrôles positifs doivent avoir une croissance logarithmique de fluorescence, une courbe d'amplification typique et une valeur de CT inférieure ou égale à 30. L'échantillon à tester est négatif si son ct est supérieur ou égal à 40 et positif s'il est inférieur ou égal à 35. Si c'est entre 35 et 40, répétez une fois. La valeur ct de l'expérience répétée est négative si elle est supérieure ou égale à 40 et positive si elle est inférieure à 35.