Cellules interstitielles du foie de rat

Rapport expérimental:

I. séparation et culture:

1, dans des conditions stériles, retirer le tissu auriculaire de rat SD d'âge 1 - 3D, puis laver ce bloc de tissu avec du PBS 2 fois, couper le tissu à environ 1 mm3 taille;

Ajouter 4 ml de digestat enzymatique (0,1% et 0,1% collagénase de type I) dans le bloc de tissu, suspendre pendant 10 s, mettre à 37 ℃ pour la digestion pendant 10 min, après quoi souffler avec un compte - gouttes pour faire une suspension unicellulaire, précipiter naturellement et recueillir le surnageant, mettre 4 ℃ après la fin de la digestion avec un milieu contenant 10% de FBS;

3, le tissu restant est ajouté 3 ~ 4 ml de digestat enzymatique, suspendu pendant 10 s, après la digestion à 37 ℃ pendant 10 min, selon la méthode ci - dessus pour recueillir le surnageant et terminer la digestion après 4 ℃ placer, répétez cette étape 2 - 3 fois jusqu'à ce que le tissu soit digéré;

4, filtrer le digestat cellulaire avec un tamis en acier inoxydable de 200 Mesh, centrifuger à 1200r / min pendant 10 min, éliminer le surnageant, les cellules précipitées sont suspendues avec du milieu contenant 10% de FBS dmem / F12, ensemencées dans des flacons de culture de 25 cm 2, placés à 37 ° C, incubés Dans un incubateur à 5% de CO2;

5, après l'application différentielle de la paroi 1H, le milieu de culture est aspiré et la culture continue comme l'expérience nécessite l'ensemencement dans une plaque de 6 puits;II. Identification par immunofluorescence:

1, à la croissance des myocytes auriculaires à 80% de fusion, le milieu de culture est abandonné et les cellules sont rincées 2 fois avec du PBS incubé pendant 10 min, puis les cellules sont fixées avec du paraformaldéhyde à 4% pendant 15 min à température ambiante;

2, PBS rincer les cellules 2 fois pendant 10 min, puis à 4 ° c Avec 0,1% Triton X - 100 perméable pendant 15 min;

3, PBS rincer les cellules 2 fois, chaque fois pendant 10 min, puis dans des conditions de température ambiante, fermer les cellules avec BSA 4% pendant 30 min;

4, diluer alpha - Actin un anti dans un rapport de 1: 100, puis placez - le dans un réfrigérateur à 4 ° C pour incuber les cellules pendant la nuit;

5, PBS rincer les cellules 3 fois, chaque fois pendant 10 min, diluer le bis - anti - alpha - actine dans un rapport de 1: 150, 37 ℃ condition de laisser 1 h;

6, rincer 3 fois avec du PBS, chaque fois pendant 10 min, observer l'image sous un microscope à fluorescence inversé et prendre des photos.

Introduction aux cellules:

Le foie est la grande glande dans le corps humain, ainsi que le gros gros gros organe organique substantiel. Les cellules interstitielles hépatiques appartiennent aux cellules souches adultes et des études ont montré qu'elles peuvent se différencier vers les os, le cartilage, les tendons, la graisse, etc. La différenciation des cellules souches adultes vers les myocytes rend beaucoup de muscles dégénératifs et héréditaires une meilleure option.

Caractéristiques des cellules:

1) et Le tissu est dérivé du tissu hépatique normal des animaux de laboratoire.

2)Identification des cellules:CD44La coloration fluorescente est positive.

3)Pureté cellulaire identifiée supérieure à90%- Oui.

4)Ne contient pasVIH-1Et,HBVEt,VHC, mycoplasmes, levures et.

5)Mode de croissance cellulaire: Long fusiforme, cellules irrégulières, culture murale.

Milieu de culture recommandé:

Nous recommandons d'utiliserDelfeInterstitiel primaire Les cellules Système de culture Comme milieu de culture pour Culture in vitro.

Précautions:

1. Après avoir reçu les cellules, observez d'abord si la bouteille de cellules est en bon état, si le liquide de culture a des fuites, des troubles et d'autres phénomènes, si l'un des phénomènes ci - dessus se produit, veuillez nous contacter à temps.

2. Lisez attentivement les instructions de la cellule pour comprendre les informations relatives aux cellules, telles que la morphologie cellulaire, le milieu de culture utilisé, la proportion de sérum, les Cytokines requises, etc., pour vous assurer que les conditions de culture cellulaire sont cohérentes, si des problèmes surviennent avec les cellules en raison de conditions de Culture incohérentes, la responsabilité incombe au client lui - même.

3. Essuyez la surface du flacon cellulaire avec de l'alcool à 75% et observez l'état des cellules au microscope. En raison de problèmes de transport, certaines cellules en raison des changements de température et de l'éclatement violent de la formation de débris, est un phénomène normal. Après avoir observé le bon état cellulaire, la paroi du flacon de désinfection à 75% d'alcool a placé le flacon t25 dans un incubateur à 37 ° C pendant 4 à 6 heures.

4. Les cellules adhérentes peuvent être digérées, les cellules en suspension mélangent directement les cellules de collecte, 900 RPM - 1000 RPM centrifuger pendant 3 minutes, abandonner le surnageant. Ajouter 5 ml de PBS cellules resuspendues, centrifuger à nouveau 900 RPM - 1000 RPM pendant 3 min, resuspendre les cellules avec du milieu frais * et ensemencer dans de nouveaux flacons ou boîtes de pétri, placer dans un incubateur pour la culture.

5. Demandez au client d'utiliser le milieu de culture dans les mêmes conditions pour la culture cellulaire.

6. Il est recommandé aux clients de prendre plusieurs photos de cellules chacun pendant les 3 premiers jours après la réception des cellules, d'enregistrer l'état des cellules, de faciliter la communication et la communication avec notre département technique. En raison du transport, des conditions instables peuvent survenir dans les cellules sensibles individuelles, veuillez nous contacter à temps pour nous informer des spécificités des cellules afin que nos techniciens puissent suivre les visites de retour jusqu'à ce que le problème soit résolu.

7. La cellule est pour l'usage scientifique seulement.

8.remarque: le milieu de culture utilisé pour le transport (milieu de culture de perfusion) ne peut plus être utilisé pour cultiver les cellules, veuillez remplacer le milieu * nouvellement formulé conformément aux conditions de culture cellulaire des instructions pour cultiver les cellules. Réception de la recommandation post - passage cellulaire 1: 2 passage.

Note: la génération 1: 2 correspond à 1 bouteille t25 pour 2 bouteilles t25 ou 2 boîtes de 6 cm. Pas 1 bouteille t25 passe 2 boîtes de 10cm.

Produits vendus par la société:

Elnelisakit

Phénitine solitaire de rat(OFQ/N)elisaKit de détection analytique

Kit ELISA OFQ/N

Globuline de cobayeG(IgG)éliseKit de détection analytique

IgGELISAKit

Marqueur fluorescent de l'agglutinine d'arachide morphologique du corps supérieur (PNA-FITC) kits de teinture

Gonadotrophines bêta chorioniques libres de rat(f-bêtaCG)élisaKits de détection

Maïs génétiquement modifiéTC1507Kit de test génétique de lignée

Souris Alpha1Glycoprotéines acides(α1-AGP)élisaKits de détection

Prolactine de singe(PRL/LTH) ElisaKit de détection analytique

Kit ELISA PRL/LTH

Dihydropyrimidase humaineNo 2 (dpysl 2) test d'immunoadsorption enzymatiqueKit de détection analytique

Dpysl 2 alises

Dinucléotide adénine(NADH)ElisaKits de détection

Caspase de rat3(CASP3)éliseKits de détection

Pyruvate Kinase cellulaire (PK) kits de détection quantitative par colorimétrie totale active

Récepteur du Mannose humain(MR)ElisaKit de détection analytique

MOSPD3Anticorps contre les protéines

MOSPD3

1Cadre de lecture Chromosome ouvert95Anticorps

C1ORF95

Facteurs de transcriptionE3 anti-TFE3

Protéines de liaison au ribosome1Anticorps Anti-RRBP1

Protéines nucléolaires3Anticorps Represseur de protéine anti-nucléolaire 3/apoptose avec CARD

3Anticorps récepteur Récepteur anti-vitamine D/VDR

Cy5Lapin marqué résistant au pouletIgG H et L

Bêta - interféron de rat(IFN-bêta/IFNB)elisaKit de détection analytique

IFN-bêtaKit ELISA IFNB

Facteur nucléaire humain κC. BInhibiteur kinase alpha(ikk -αElisaKit de détection analytique

Cellules interstitielles du foie de ratLes humains -αPersuasive.