Cellules primaires de rat

Cellules primaires de ratMéthodes de transmission:

I. passage digestif des cellules plaquées

1, aspirer ou verser l'ancienne solution de culture dans le flacon.

Ajouter 1 ml de digestif gauche et droite (mélangé avec EDTA) agiter doucement le flacon de culture de sorte que les cellules du fond du flacon soient immergées dans la solution.

3, digestion après 2 - 5 minutes placer le flacon de culture sous le microscope pour l'observation, il a été constaté que les cellules de la paroi originale ont progressivement tendance à être arrondies, quand il n'a pas encore dérivé, jeter le suc digestif, ajouter le liquide de culture pour terminer la digestion.

4, souffler les cellules collées en suspension avec une paille, ensemencer séparément dans deux ou trois autres flacons de culture, placer dans un incubateur à 37 ° C pour poursuivre la culture. Observez la croissance du mur le deuxième jour.

II. Passage des cellules en suspension

1, génération directe

1) après avoir laissé les cellules en suspension se déposer lentement au fond du flacon, aspirer le limon supérieur 1 / 2 - 2 / 3.

2) après avoir soufflé avec une paille pour former une suspension cellulaire, ensemencer séparément dans deux ou trois autres flacons de culture, incuber dans un incubateur à 37 ° c.

2, la méthode centrifuge

1) Transférer les cellules avec le liquide de culture à l'intérieur du tube de centrifugation et centrifuger 800 - 1000 RPM pendant 5 minutes.

2) Enlever le surnageant, ajouter une nouvelle solution de culture à l'intérieur du tube de centrifugation et souffler avec une paille pour former une suspension cellulaire.

3) ensemencer les suspensions cellulaires séparément dans deux ou trois autres flacons de culture dans un incubateur à 37 ° c.

Cellules primaires de rat5 erreurs courantes en culture

Erreur 1:Un petit tube de cellules primaires décongelé dans un bain d'eau pendant un certain temps

Correction 1: les cellules primaires sont très sensibles au processus de décongélation, il est donc important de placer le flacon dans un bain - Marie à 37 ° C, de le maintenir et de le faire tourner doucement jusqu'à ce que le contenu soit décongelé. Le flacon doit ensuite être immédiatement retiré du bain - Marie et transféré à la table d'opération stérile. Assurez - vous que votre flacon de culture est prêt avant la décongélation afin qu'il puisse être immédiatement utilisé pour inoculer les cellules et placé dans l'incubateur.

Erreur 2:Centrifugation directe des cellules primaires Après décongélation du flacon

Correction 2:Nous ne recommandons pas de centrifuger les cellules Après décongélation, car la procédure de centrifugation est plus nocive que de petites quantités de résidus de DMSO. N'oubliez pas de changer le milieu de culture le lendemain de la récupération des cellules primaires pour éliminer tout DMSO résiduel.

Erreur 3:Permettre aux cellules primaires de devenir trop fusionnées

Correction 3:Lorsque la croissance atteint 100 Confluences, les cellules primaires peuvent devenir sénescentes. Rappelez - vous que les cellules primaires ne sont pas 100 pures, il est donc important de minimiser la croissance des cellules contaminées. Nous recommandons une culture de passage des cellules primaires lorsque les cellules atteignent 90 - 95% de fusion.

Erreur 4:Les cellules primaires peuvent être facilement congelées

Correction 4:Habituellement, nous ne recommandons pas la recongélation des cellules primaires conservées, car cela peut favoriser le vieillissement cellulaire et / ou entraîner des changements fonctionnels. Les cellules primaires sont très sensibles et la recongélation peut entraîner la mort ou des dommages cellulaires.

Erreur 5:Les cellules primaires peuvent proliférer indéfiniment

Correction 5:Contrairement aux lignées cellulaires, les cellules primaires ont une capacité d'amplification limitée. Nous recommandons d'expérimenter avec des cellules primaires le plus tôt possible pour prévenir la dérive génétique. En outre, si vous utilisez un type de cellule difficile à ajouter de la valeur, vous devez surveiller de près la morphologie cellulaire, car un petit nombre de cellules mélangées (comme les fibroblastes) peuvent croître en grand nombre au fil du temps et devenir ainsi des cellules dominantes.