Cellules épithéliales sclérales de rat

Rapport expérimental:

I. séparation et culture:

1, dans des conditions stériles, retirer le tissu auriculaire de rat SD d'âge 1 - 3D, puis laver ce bloc de tissu avec du PBS 2 fois, couper le tissu à environ 1 mm3 taille;

Ajouter 4 ml de digestat enzymatique (0,1% et 0,1% collagénase de type I) dans le bloc de tissu, suspendre pendant 10 s, mettre à 37 ℃ pour la digestion pendant 10 min, après quoi souffler avec un compte - gouttes pour faire une suspension unicellulaire, précipiter naturellement et recueillir le surnageant, mettre 4 ℃ après la fin de la digestion avec un milieu contenant 10% de FBS;

3, le tissu restant est ajouté 3 ~ 4 ml de digestat enzymatique, suspendu pendant 10 s, après la digestion à 37 ℃ pendant 10 min, selon la méthode ci - dessus pour recueillir le surnageant et terminer la digestion après 4 ℃ placer, répétez cette étape 2 - 3 fois jusqu'à ce que le tissu soit digéré;

4, filtrer le digestat cellulaire avec un tamis en acier inoxydable de 200 Mesh, centrifuger à 1200r / min pendant 10 min, éliminer le surnageant, les cellules précipitées sont suspendues avec du milieu contenant 10% de FBS dmem / F12, ensemencées dans des flacons de culture de 25 cm 2, placés à 37 ° C, incubés Dans un incubateur à 5% de CO2;

5, après l'application différentielle de la paroi 1H, le milieu de culture est aspiré et la culture continue comme l'expérience nécessite l'ensemencement dans une plaque de 6 puits;II. Identification par immunofluorescence:

1, à la croissance des myocytes auriculaires à 80% de fusion, le milieu de culture est abandonné et les cellules sont rincées 2 fois avec du PBS incubé pendant 10 min, puis les cellules sont fixées avec du paraformaldéhyde à 4% pendant 15 min à température ambiante;

2, PBS rincer les cellules 2 fois pendant 10 min, puis à 4 ° c Avec 0,1% Triton X - 100 perméable pendant 15 min;

3, PBS rincer les cellules 2 fois, chaque fois pendant 10 min, puis dans des conditions de température ambiante, fermer les cellules avec BSA 4% pendant 30 min;

4, diluer alpha - Actin un anti dans un rapport de 1: 100, puis placez - le dans un réfrigérateur à 4 ° C pour incuber les cellules pendant la nuit;

5, PBS rincer les cellules 3 fois, chaque fois pendant 10 min, diluer le bis - anti - alpha - actine dans un rapport de 1: 150, 37 ℃ condition de laisser 1 h;

6, rincer 3 fois avec du PBS, chaque fois pendant 10 min, observer l'image sous un microscope à fluorescence inversé et prendre des photos.

Introduction aux cellules:

La sclérotique est la couche externe de la paroi du globe oculaire, constituée de fibres denses de collagène et élastiques, dont la structure est dure et opaque. Le bord antérieur de la sclère rejoint le bord de la cornée et se poursuit à l'arrière avec la gaine durale du nerf optique.

La sclérotique est divisée par l'extraversion interne en: couche supérieure sclérale; Couche primaire; La couche inférieure sclérale. Dont la couche supérieure est constituée de cellules épithéliales.

Caractéristiques des cellules:

1) et Le tissu est dérivé du tissu oculaire normal des animaux de laboratoire.

2)Identification cellulaire: kératine à large spectre(PCK)La coloration fluorescente est positive.

3)Pureté cellulaire identifiée supérieure à90%- Oui.

4)Ne contient pasVIH-1Et,HBVEt,VHC, mycoplasmes, levures et.

5)Mode de croissance cellulaire: épithélium, cellules irrégulières, culture murale.

Milieu de culture recommandé:

Nous recommandons d'utiliserDelfeLa génération originale épithélium Système de culture cellulaire Comme milieu de culture pour Culture in vitro.

Précautions:

1. Après avoir reçu les cellules, observez d'abord si la bouteille de cellules est en bon état, si le liquide de culture a des fuites, des troubles et d'autres phénomènes, si l'un des phénomènes ci - dessus se produit, veuillez nous contacter à temps.

2. Lisez attentivement les instructions de la cellule pour comprendre les informations relatives aux cellules, telles que la morphologie cellulaire, le milieu de culture utilisé, la proportion de sérum, les Cytokines requises, etc., pour vous assurer que les conditions de culture cellulaire sont cohérentes, si des problèmes surviennent avec les cellules en raison de conditions de Culture incohérentes, la responsabilité incombe au client lui - même.

3. Essuyez la surface du flacon cellulaire avec de l'alcool à 75% et observez l'état des cellules au microscope. En raison de problèmes de transport, certaines cellules en raison des changements de température et de l'éclatement violent de la formation de débris, est un phénomène normal. Après avoir observé le bon état cellulaire, la paroi du flacon de désinfection à 75% d'alcool a placé le flacon t25 dans un incubateur à 37 ° C pendant 4 à 6 heures.

4. Les cellules adhérentes peuvent être digérées, les cellules en suspension mélangent directement les cellules de collecte, 900 RPM - 1000 RPM centrifuger pendant 3 minutes, abandonner le surnageant. Ajouter 5 ml de PBS cellules resuspendues, centrifuger à nouveau 900 RPM - 1000 RPM pendant 3 min, resuspendre les cellules avec du milieu frais * et ensemencer dans de nouveaux flacons ou boîtes de pétri, placer dans un incubateur pour la culture.

5. Demandez au client d'utiliser le milieu de culture dans les mêmes conditions pour la culture cellulaire.

6. Il est recommandé aux clients de prendre plusieurs photos de cellules chacun pendant les 3 premiers jours après la réception des cellules, d'enregistrer l'état des cellules, de faciliter la communication et la communication avec notre département technique. En raison du transport, des conditions instables peuvent survenir dans les cellules sensibles individuelles, veuillez nous contacter à temps pour nous informer des spécificités des cellules afin que nos techniciens puissent suivre les visites de retour jusqu'à ce que le problème soit résolu.

7. La cellule est pour l'usage scientifique seulement.

8.remarque: le milieu de culture utilisé pour le transport (milieu de culture de perfusion) ne peut plus être utilisé pour cultiver les cellules, veuillez remplacer le milieu * nouvellement formulé conformément aux conditions de culture cellulaire des instructions pour cultiver les cellules. Réception de la recommandation post - passage cellulaire 1: 2 passage.

Note: la génération 1: 2 correspond à 1 bouteille t25 pour 2 bouteilles t25 ou 2 boîtes de 6 cm. Pas 1 bouteille t25 passe 2 boîtes de 10cm.

Produits vendus par la société:

Protéines liant les acides gras intestinaux de rat(iFABP)ElisaKits de détection

Réactifs analytiques acétylés sujets

Interleukine de souris4(IL-4)élisaKit de détection analytique

Mono - déhydroascorbate réductase (MDHAR) boîte de test

Les cellulesCYP2B1Kit de détection quantitative par fluorescence de l'expression des protéines

Kit de détection rouge neutre fonctionnel Lysosomal purifié

大鼠整合素α6(ITG)α6)ÉlisaKits de détection

Blessures fécales (Salmonelle Typhi) kits de tests génétiques qualitatifs

Inhibiteurs de la bêta - lactamase chez la souris(BLI) ElisaTest gratuit du kit de détection

BTB/POZProtéines de domaine19AnticorpsBTBD19

CD43Anticorps monoclonauxCD43

Récepteur des peptides natriurétiquesCAnticorps monoclonauxrécepteur peptidique C

PhosphorylationHandicapés 1AnticorpsPhospho-Dab1 (Ser491)

γ-Glutamyl transpeptidase2Anticorps à chaîne lourdeChaîne lourde GGT2

Interleukine1Le récepteur1AnticorpsIL-1R1

CytochromesP450 2C18AnticorpsCYP2C18

Inhibiteurs de kinase cycline - dépendants2CAnticorpsCDKN2C/p18 INK4c

LType calcium channel proteina1Sous - type6AnticorpsCACH6/Cav2.3

MSI2Anticorps contre les protéinesMSI2

Anticorps monoclonauxFibrinogène humain

Protéines de la famille des transporteurs de solutés38MembresA8AnticorpsSLC38A9

Protéines Anchor - like spécifiques des testicules1AnticorpsANKMY1

Protéines morphogénétiques osseuses9AnticorpsBMP9

Facteur de maturation de la lipase1AnticorpsLMF1

Kinase cycline - dépendante8AnticorpsCDK8

Cycle cellulaire de levureMÉtapes de la période (SYNCHRONIE) kits de traitement

KIAA1614Anticorps contre les protéines

KIAA1614

ATP5EAnticorps contre les protéines

Cellules épithéliales sclérales de ratATP5E