Expériences avec le système crispr / cas12b

NégociableMise à jour sur03/04

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Vue d'ensemble

Expérience du système crispr / cas12b: crispr / cas12b (anciennement c2c1) appartient au système crispr de type V - B de classe 2 et est un outil d'édition de gènes important après cas9 et cas12a.

Détails du produit

I. Mécanismes moléculaires et propriétés structurelles

I) Définition et classification des systèmes

CRISPR/Cas12b(anciennement appeléC2c1) appartenant àClasse 2 Type V - B système crisprC'est un outil d'édition de gènes important après cas9 et cas12a. Ses principales caractéristiques comprennent:

Mécanisme de guidage double ARNPour:

NécessairecrARNAvectracrARN(qui peut être fusionné en sgrna) Co - guide la coupure ciblée, qui combine certaines des propriétés de cas9 et cas12a.

Mode de coupePour:

UniqueDomaine ruvcCouper l'ADN double brin pour formerExtrémités visqueuses de 5 - 6 nt(5’ proéminent) en faveur de la réparation de recombinaison homologue (HDR).

Reconnaissance PAMPour:

DépendanceSéquence PAM t - rich(comme 5 '- TTN - 3') qui étend les capacités d'édition du génome enrichi en at.

Ii) Avantages structurels

Caractéristiques	Cas12b	Comparaison cas9 / cas12a
Taille des protéines	Environ 1100 acides aminés(minimum)	Plus petit que cas9 (1600 aa) et cas12a (1300 aa)
Besoins en ARN	Crrna + tracrrna requis (peut être fusionné en sgrna)	Plus complexe que cas12a (crrna uniquement), mais plus simplifié que cas9
Stabilité thermique	Type sensible à la température(40 - 55 ℃ activé)	Modification technique nécessaire pour adapter les cellules de mammifères

II. Avantages techniques et performances

(i) Principaux avantages

Faible taux de ciblagePour:

La détection Guide - seq montre un taux de désactivationNettement inférieur à cas9(réduction > 50% des insertions erronées / manquantes).

Haute spécificitéPour:

Les séquences guidées par crrna sont plus longues (> 42 nt) et ciblées avec une plus grande précision.

Mode d'éditionPour:

InductionFaible taux de mutation d'insertion pure, plus enclin à produire de petites délétions de fragments, réduisant l'imprévisibilité fonctionnelle.

Adaptation des vecteurs virauxPour:

Petit poids moléculaire plus facile à emballer dansAAV ou vecteur LentiviralAméliorer l'efficacité de la livraison dans le corps.

(II) par rapport aux systèmes similaires

paramètre	Cas12b	Cas9	Cas12a
La séquence PAM	5 '- TTN - 3' (t enrichi)	5 '- ngg - 3' (G enrichi)	5 '- tttv - 3' (t enrichi)
Couper les extrémités	黏性末端（5' 突出）	Extrémité plate	黏性末端（5' 突出）
Activité de coupe trans	❌ Rien	❌ Rien	✅ Oui (peut couper ssdna)
Edition multigénique	Nécessite plusieurs sgrna	Nécessite plusieurs sgrna	✅ Support des réseaux crrna

Note: le mode de coupe cas12b le rendThérapie géniqueLa production de nouveaux épitopes est évitée, ce qui réduit le risque immunitaire.

Iii. Scénarios d'application et cas de pointe

I) applications biomédicales

Traitement antiviralPour:

Le VIH: une seule édition dans les cellules T élimine tout le VIH infectieux avec une efficacité supérieure à celle de cas9.

Réparation des maladies génétiquesPour:

Mise en œuvre conjointe de la voie HDRRéparation de précision génétique de la bêta - thalassémieL'hémoglobine est revenue à un niveau normal.

Immunité tumoralePour:

ModifierDouble cible Pd - 1 / ctla - 4Réduire la déplétion des cellules car - t.

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