Talens modèles animaux

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Vue d'ensemble

Talens Animal Model Building est un modèle animal expérimental construit à l'aide de la technologie d'édition de gènes talens. Talens permettent une édition précise du génome en fusionnant le domaine de liaison à l'ADN d'un effecteur de type activateur de transcription (Tale) avec le domaine de clivage d'une nucléase (foki).

Détails du produit

Talens modèles animaux

I. principes techniques de talens et percée de base

I) conception structurelle et mécanismes d'action

Talens (transcription activator like effector Nucleases) est unNucléases artificiellement modifiées, composé de deux parties:

Domaine de reconnaissance de l'ADN (protéine Tale)Pour:

ParUnités répétées de 34 acides aminésComposition, chaque unité passeAcides aminés variables (RVD) en position 12, 13Reconnaissance spécifique d'une seule base:

Type de RVD	Identification des bases	Force de liaison
NI	Un	Haute spécificité
NG	T	Haute spécificité
HD	C	Haute spécificité
NN	G/A	Identification croisée

La longueur de la séquence d'identification est généralement15 à 20 pbAssurer une identité Wei ciblée.

Domaine de coupure de l'ADN (nucléase foki)Pour:

Besoin de formerDimèresL'ADN peut être coupé, de sorte que les talens doivent être conçus par paires (bras droit gauche) avec des sites de coupe situés entre les deux bras (la zone d'espacement est généralement de 12 à 20 Pb).

Ii) Mécanismes d'édition génétique

Rupture de double chaîne (DSB)Pour:

Tale se lie à la séquence cible → dimérisation foki → clivage du double brin d'ADN.

Réparer le cheminPour:

Connexion terminale non homologue (nhej): insertion / délétion aléatoire (indels), entraînant le Knockout.
Réparation directionnelle homologue (HDR): nécessite un modèle de réparation exogène pour réaliser une insertion précise ou une mutation ponctuelle.

Percée technologique: Shu mise en œuvreSites génomiques arbitrairesLa précision de la coupe et le taux de désactivation sont inférieurs à ceux de la technologie ZFN antérieure.

Deux,Talens modèles animauxConstruire le processus

(i) Étapes opérationnelles normalisées

Ii) Optimisation des technologies clés

étape	Opérations de base	Programme d'innovation
Conception de cibles	Évitez les séquences répétées / régions méthylées, les espaceurs sont optimisés à 14 - 18 pb	La prédiction logicielle (talen targeter) augmente le taux de réussite
Assemblage de modules	Méthode de clonage Golden GatePour:

6 modules en série (+ 63 architecture)
Connexion enzymatique coupée (BSAI / bsmbi) | construction terminée en 6 jours, efficacité multipliée par 5 |
|Vecteur d'expression| vecteur mammifère à double promoteur (CMV / t7) supportant la transfection cellulaire et la synthèse d'ARNm | applications multi - espèces adaptées (poisson zèbre, souris, cellules IPS humaines) |
|Vérification de l'activité| système d'hybridation unique de levure ou test génétique à cellules rapportées | ciblage alternatif des cellules es chronophages, cycle réduit à 1 semaine |
|Livraison d'embryons| microinjection d'ovules fécondés:
ARNm: talens produits de transcription in vitro
Complexe RNP: complexe protéique Tale - foki | RNP réduit les effets de désciblage et améliore la sécurité

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