Es services techniques de ciblage

Un,Es services techniques de ciblageDéfinition technique et principes fondamentaux

Es technologie de ciblageEst une méthode d'édition de gènes basée sur la recombinaison homologue de cellules souches embryonnaires (embryonic stem cells, es) qui permet des modifications précises telles que le Knockout (Ko), le Knockout conditionnel (cko), le Knockout (ki) et la mutation ponctuelle (PM) en intégrant des points d'ADN exogènes à des emplacements spécifiques du génome. Ses principes fondamentaux comprennent:

1. Mécanisme de recombinaison homologuePour:

• Le design contientBras homologuesVecteur (homologue au gène cible) dans lequel une séquence exogène (par exemple, un gène marqueur de criblage) est insérée dans le site cible par recombinaison homologue.

2. Système de filtrage positif et négatifPour:

• Filtrer les marqueurs positifs(par exemple neoᵣ): insérez la région homologue et criblez les cellules es recombinantes avec succès.

• Marqueurs de filtre négatifs(par exemple, HSV - tk / DTA): situé à l'extérieur du bras homologue, élimine les cellules insérées au hasard.

3. Totipotence des cellules souches embryonnairesPour:

• Les cellules es modifiées ont été injectées dans le blastocyste et se sont développées en souris chimériques (f0), obtenant un modèle génétique stable par transmission germinale.

Positionnement technique: es Targeting est l'étalon - or de l'ère pré - crispr, en particulier pourGros fragments Modifier(> 10 KB) etModification génétique complexe(comme le Knockout conditionnel).

Deux,Es services techniques de ciblageProcessus opérationnels normalisés et innovation technologique

(i) Processus de ciblage es traditionnel (7 - 12 mois)

Analyse des étapes clésPour:

1. Construction du vecteurPour:

• La longueur du bras homologue est généralement de 3 à 5 KB et l'insertion de gros fragments nécessite un vecteur bac.

2. Sélection de lignées cellulaires esPour:

• Lignées fréquemment utilisées: 129s6 / svevtac (haute efficacité de recombinaison), C57BL / 6N (pureté de fond).

3. Préparation de chimèresPour:

• Le taux d'chimérisation après l'injection de blastocystes est d'environ 20 à 70%, ce qui nécessite un dépistage intuitif par des marqueurs de couleur capillaire tels que l'hôte albinos.

Ii) innovations technologiques: ciblage des cellules EPS

Cellules EPS(Extended Pluripotent Stem Cells) rapporté par nos scientifiques en 2017, ses avantages comprennent:

1. Amélioration de l'efficacitéPour:

• Efficacité de ciblage jusqu'aux cellules es traditionnelles10 - 100 fois- Oui.

2. Réduction du cyclePour:

• Les chimères sont obtenues en une étape, en éliminant 3 mois de transfert Germinal.

3. Omnipotence augmentéePour:

• L'injection d'une seule cellule dans le blastocyste produit 99,99% de chimères.